周佳锋，马孟杰，彭小忠,2*，舒鹏程*

(1.中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 医学灵长类研究中心 神经科学中心，北京 100005；2.中国医学科学院 医学生物学研究所，云南 昆明 650118)

大脑皮质作为神经系统的最高级部分，在意识、运动调节等多方面发挥重要功能，而神经祖细胞(neural progenitor cells, NPCs)在大脑皮质的发育中起到至关重要的作用。发育早期神经祖细胞不对称分裂产生神经元，而在晚期部分细胞能继续产生胶质细胞[1]。因此研究神经祖细胞能够加深人们对大脑皮质的了解。

特异的标记以及分选神经祖细胞是研究祖细胞必不可少的实验。目前常用的标记方法包括5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2’-deoxyuridine, BrdU)标记、病毒标记以及子宫内电转(in utero electroporation)标记[2-6]。羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, CFSE)可透膜，在胞内被水解为乙酸基团，水解后的CFSE无法透膜，结合胞内蛋白从而稳定标记细胞[7]。将CFSE注射到侧脑室，所有与脑脊液直接接触的细胞都将被标记，包括处于M期的神经祖细胞[8]。Denis Jabaudon等人开发的FlashTag技术就用到了上述的原理[7]。然而若要做到上述的特异标记神经祖细胞，必然要求染料能够较好地局限在脑室区，而非向上扩散到皮质板区。本研究探索了CFSE标记神经祖细胞的方法并进行了体内、体外验证。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：本研究用到的所有小鼠均为SPF级CD-1孕鼠，购自北京大学医学部，12周龄，怀孕天数为14.5 d，体质量在50 g左右。完成实验后的小鼠通过颈椎脱臼法处死。……