潘自强，杨佳丽，赵希荣

淮阴工学院生命科学与食品工程学院，农产品生物加工与分离实验室（淮安 223003）

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶（NAD 激酶，NADK）是目前发现的生物体内唯一催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）生成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）的酶[1]，可以催化NAD（H）以ATP或poly（p）作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP（H）[2-3]。由于NAD激酶价格昂贵，在实际生产NADP过程中难以回收，使得生产成本大大增加。将NAD激酶进行固定化，减少后期分离程序，实现固定化酶的重复利用就显得非常有意义[4]。目前，酶固定化常采用吸附、交联、包埋等技术；其中共价交联法固定酶时，能在较温和的条件下将酶很好的固定在载体上[5]。壳聚糖（chitosan，β-1,4-2-氨基葡萄糖，CS）是一种氨基多糖，具有无毒、可生物降解、生物相溶性等优点。壳聚糖分子链上存在大量的氨基和羟基，故常作为磁性-高分子材料的“外壳”被广泛应用于酶的固定化[6]。磁性壳聚糖微球作为一种新型功能高分子材料，已作为载体被广泛应用于酶的固定化领域[7-8]。研究以磁性壳聚糖微球为载体，戊二醛做交联剂对NAD激酶固定化进行探究（试验路线见图1）；优化酶固定化条件，并探究固定化酶的相关稳定性，旨在试验酶的重复利用。

图1 酶固定化的试验路线

1 材料与方法

1.1 仪器

真空冷冻干燥机（LABCONCO，美国）；KQ-300DE型数控超声清洗器（昆山仪器有限公司）；数显恒温水浴锅（常州高德仪器有限公司）；台式离心机（上海安亭仪器有限公司）；UV-1200紫外可见分光光度计（上海美谱达）；S-3000N扫描式电子显微镜（日本）。……