孙守栋 陈 烨 朱静轩 杨雪静

肺炎克雷伯菌易定植于肠道、呼吸道等部位，是目前临床院内感染及社区获得性感染的重要病原体之一。近年来，随着诊疗技术增加及广谱抗菌药物的广泛使用，肺炎克雷伯菌引起的无菌体腔感染越来越受到临床重视[1～3]。现国内外有关分离自无菌体液的肺炎克雷伯菌的毒力因子及耐药性综合分析报道较少，本研究对浙江中医药大学附属第一医院收集的SBF-KP菌株的临床分布、药敏状况、黏液表型、荚膜血清型及毒力基因携带情况进行分析，以期为临床诊治无菌体液肺炎克雷伯菌感染提供参考。

材料与方法

1.菌株来源：收集浙江中医药大学附属第一医院2017年8月～2019年12月无菌体液标本(胸腹腔积液、脓液、胆汁、脑脊液、关节腔积液、骨髓等，不包括血液及尿液)分离的肺炎克雷伯菌83株，剔除同一患者重复菌株。无菌体液：在标本采集、标本处理过程中严格无菌操作，分离出的细菌被认为是感染菌的液体标本。

2.仪器与试剂：MALDI-TOF质谱仪(Bruker)、Vitek-2 Compact 全自动微生物分析系统(法国梅里埃公司)、PCR 仪(美国 Bio-Rad 公司)、10×AceTaq PCR Buffer(含Mg+2)及PCR试剂购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司、电泳仪及紫外凝胶成像仪(上海天能科技有限公司)、细菌核酸提取盒[天根生化科技(北京)有限公司]、PCR扩增引物合成及产物测序由北京擎科新业生物技术有限公司完成。

3.菌株鉴定及药敏试验：按照《全国临床检验操作规程》进行无菌体液标本采集与细菌分离培养，阳性菌株采用MALDI-TOF质谱仪及Vitek-2 Compact 系统进行细菌鉴定及药敏试验(质谱仪鉴定率需达到2.0以上)。……