杨 阳 杨晓敏 胡秀华 曹 简郭血骄 杨向竹 郭 健 赵俊云

失眠是众多睡眠障碍中最为常见的一种，主要表现为入睡难、清醒早、睡眠质量低和睡眠时间短等特点。长时间的失眠状态将导致严重的后果，如记忆力或注意力的下降、各种慢性疾病或精神疾病，包括阿尔茨海默病、衰老等[1]。对氯苯丙氨酸(para-Chlorophenylalanine, PCPA)是经典失眠动物模型的诱导因素。PCPA可以通过抑制色氨酸羟化酶以阻碍5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)的合成进而导致失眠，目前对PCPA致失眠的机制研究也多集中在5-HT方面。失眠与多种因素有关，其中控制昼夜节律的生物钟系统起着主导作用。生物钟系统包括位于下丘脑的主钟以及外周各器官的外周时钟，其中主钟于视交叉上核(suprachiasmatic nucleus, SCN)产生节律信号并通过神经和体液的方式送往全身。机体的自主性节律主要是由时钟基因Clock、Bmal1、Per和Cry基因通过负反馈调节所形成的。肝脏是涉及糖代谢和脂代谢，并与时钟基因联系紧密的重要子钟器官之一，其功能的发挥受到主钟和外周时钟的精密调控。本研究采用经典失眠动物模型(PCPA致失眠大鼠)，探究PCPA致失眠大鼠中脑部和肝脏时钟基因的表达变化，进一步探讨失眠与时钟基因表达变化的关系。

材料与方法

1.材料：16只SPF级雄性SD大鼠，年龄6～8周，体质量200±20g，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，实验动物许可证号为SCXK(京)2015-0015。其他主要材料：PCPA(美国Ark PharmLnc.公司，批号：AK-80383，纯度>98%)，Trizol(美国Invitrogen公司)，M-MLV反转录酶、dNTP(10mmol/L)、2(Ex TaqMix[宝生物工程(大连)有限公司]，DNase Ⅰ、RNase Inhibitor、6×Loading Buffer[美国Fermentas(MBI)公司]，引物(北京中美泰和生物技术有限公司)，ELISA检测试剂盒(北京奇松生物科技有限公司)。实……