李梦琴，朱 梅，冯煜然，范 旭

(昆明医科大学第一附属医院超声科，云南 昆明 650032)

甲状腺结节发病率达70%。采用微波消融原位灭活可致肿瘤细胞坏死，但消融过程中过高热能可能损伤周围组织[1]。细胞凋亡是启动自主程序性死亡的过程[2]，诱导凋亡所需消融能量或化学治疗(简称化疗)剂量通常较低，可显著提升治疗的安全性。目前多通过实验室检测方法识别和评价凋亡，如光镜/电镜下观察形态学、检测DNA片段、凋亡相关基因及产物等[3]。膜联蛋白Ⅴ(annexin Ⅴ)实验室检测细胞凋亡已得到广泛临床应用，核素显像及CT、MRI分子影像领域相继开展了相关实验研究，但以声学显影方法实时识别凋亡的研究报道较少。本研究尝试制备可靶向识别凋亡细胞的超声微泡(microbubbles, MB)，并评价其体外识别凋亡细胞的能力，旨在以简便直观的影像学方法判定肿瘤凋亡及凋亡范围。

1 材料与方法

1.1 主要材料 CAL-62人甲状腺未分化癌细胞株(北纳生物)，annexin Ⅴ抗体、山羊抗兔IgG-FITC(Abcom公司)，亲和素(avidin，Sigma-Aldrich公司)，二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoyl phosphatidyl choline， DPPC)、甲氧基聚乙二醇(methoxypolyethylene glycols， MPEG)200、二棕榈酰基磷脂酸(dipalmitoyl phosphonic acid， DPPA)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(distearoylphosphatidylethanolamine-polyethylene glycol， DSPE-PEG)2000、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素(dipalmitoylphosphatidylethanolamine-polyethylene glycol-biotin， DSPE-PEG-Biotin)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dipalmitoylphosphatidylethanolamine-polyethylene glycol， DSPE-PEG)200(Avanti公司)，细胞培养液Hyclone(DMEM公司)，annexin Ⅴ/碘化丙啶(annexin Ⅴ/propidium iodide， annexin Ⅴ/PI)凋亡试剂盒(BD公司)，一步法Tunel细胞凋亡原位检测试剂盒(KeyGEN BioTECH公司),细胞膜红色荧光探针(DiI，索莱宝公司)。

1.2 主要仪器 Olympus荧光显微镜，RHERMO台式高速冷冻离心机，威尔德机械振荡仪，Malvern表面电位仪，康友微波消融仪，诺禾致源流式细胞仪。

1.3 制……