刘玲玲，梅继林，李 诺，李晓宁

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040； 2.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001)

脊髓损伤(Spinal cord injury，SCI)患者通常长期残疾，丧失工作和日常生活能力，需要长期甚至终生的医疗护理[1-2]。脊髓损伤后脊髓组织微环境平衡被破坏，导致占主导地位的神经免疫细胞——小胶质细胞过度活化，在脊髓局部微环境中进一步发生炎症反应、氧化应激及细胞凋亡等病理机制，加重神经元继发性损伤，在病理机制中炎症反应又扮演着重要角色，因此学者将如何在脊髓损伤发生后及时控制炎症反应作为研究治疗脊髓损伤的重中之重[3]。课题组前期研究发现夹脊电针能通过抑制脊髓损伤大鼠NLRP3炎症小体的活化，达到减轻脊髓损伤后炎性损伤作用[4]，然而调控NLRP3炎症小体的上游因子还不清楚。本研究通过检测SCI大鼠夹脊电针治疗后微环境中 P2X7R/NLRP3信号通路相关因子表达变化，探讨该信号通路对炎症反应可能的作用机制。

1 实验材料

1.1 实验动物及分组

Sprague-Dawley(SD)大鼠120只，由辽宁长生生物技术有限公司提供。随机分为5组，假手术组(Sham)、模型组(Model)、夹脊电针组(EA)、P2X7干扰组(P2X7R siRNA)和干扰对照组(Control siRNA)；每组又划分成1 d、3 d、7 d和21 d共4个时间点，实验过程遵照国际方面相关的动物使用标准。

1.2 主要试剂及仪器

1.2.1 试剂 过氧化氢(国药，中国)；苏木精、 DAB 显色液、山羊血清和抗荧光衰减封片剂(Solarbio，中国)；cleaved caspase-1(Wanleibio，中国)；OX42(abcam，美国)；P2RX7(alomone，以色列)；IL-1β(Bioss，中国)；Cy3标记山羊抗兔IgG、FITC标记山羊抗小鼠IgG(中国Beyotime)；HRP标记山羊抗兔IgG(thermofisher，美国)；P2X7慢病毒、阴性对照慢病毒(沈阳万类生物科技有限公司)。……