郭春，叶小康

（浙江大学医学院1.公共技术平台，2.基础医学系，浙江 杭州310012）

间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSC）是一类具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，因其独特的分化潜能、造血支持和免疫调控等特性，MSC 已作为一种细胞治疗手段被广泛的应用于多种疾病。最初，MSC 被认为可巢居到受损部位后，通过定向分化成靶细胞和直接的细胞间相互作用来发挥功能[1]。然而，有研究表明MSC 巢居到损伤部位的比例和分化为靶细胞的数量都是非常有限，且移植后产生治疗效应的时间与其所需的漫长的迁移分化时间不符，后续研究表明MSC通过旁分泌携带活性的蛋白质、细胞因子和核酸类物质的细胞外囊泡（EVs）方式发挥对器官的修复、保护及治疗功能[2]。尽管极具应用潜力，但由于对MSC-EVs 的研究尚在摸索阶段，且缺乏灵敏的EVs 制备和分析技术，所以在临床转化上仍有障碍。

1 EVs的分类命名及分子组成

EVs 由细胞主动释放到细胞外环境中的纳米级膜性囊泡，根据EVs 大小和来源的不同将其大致分为3 类：①凋亡小体800～5000 nm，在细胞发生凋亡时从细胞脱落而产生；②微囊泡（MVs）200～1 000 nm，由质膜以直接出牙的方式产生，MVs 产生过程与胞质内钙离子浓度的增加和细胞膜骨架的重构有关；③外泌体（Exos）30～150 nm，由多囊体分泌，主要通过胞吐过程释放，与细胞骨架的激活和钙离子浓度相关[3]。

EVs 富含脂类、胞浆蛋白、核酸等物质，且其蛋白组成在一定程度上可以指示生物来源和分类[4]。MSC-EVs 有着与其他细胞EVs 相似的内容物，如TSPAN 蛋白超家族CD63、CD9、CD81 和热休克蛋白HSP70、HSP90 等，这些是分析鉴定EVs的重要标志物。……