肝癌细胞中丛生蛋白的差异性表达检测和启动子表达质粒的构建
2021-04-08于秋丽
中国临床新医学 2021年3期
于秋丽,王 峰
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的肝脏恶性肿瘤[1],肝癌的发生发展是环境、病毒、癌基因激活和抑癌基因突变等多种因素共同作用的结果。目前其治疗以手术、介入治疗、分子靶向治疗以及全身系统化疗等多种治疗手段联合应用为主。由于肝癌发病早期缺乏典型特征和特异性生物标志物,多数患者确诊时已处于中晚期,失去了最佳的治疗时机,以致肝癌是所有癌症相关死亡的第三大死亡原因[2]。阐明肝癌发生、发展和转移的分子基础,找到用于肝癌早期检测和分子靶点的生物标志物,将为肝癌的早期诊断和治疗提供新的视角。丛生蛋白(clusterin,CLU)是一种应激诱导的细胞保护伴侣蛋白,在多种癌症中过表达,以应对化疗、激素消融术和放射治疗等癌症治疗方法,从而产生抵抗性[3,4]。为探究HCC中CLU的表达,Kang等[5]用组织微阵列方法检查了100例手术切除的HCC组织,发现共有89例HCC组织表现出CLU过表达,这与肿瘤不良的Edmondson组织学分级和高TNM分期有关。另一项研究[4]表明CLU过表达是肝癌转移的重要因素,这可能与人类软骨糖蛋白-39在HCC中的转移作用有关。鉴于CLU在肝癌的发生、发展中的重要作用,本研究对CLU在肝癌细胞HepG2中的表达情况进行定量并构建其启动子的表达质粒,以期对其在肝癌中的转录调控机制进行进一步的研究。
1 材料与方法
1.1细胞培养 肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞L02均是本实验室保存。上述细胞分别培养于含有10%胎牛血清(Gibco公司)的DMEM高糖培养基(Gibco公司)和含有10%胎牛血清的1640培养基(Gibco公司)培养液中。……
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