罗 川，李 锦，张万年，缪震元 （. 安徽华润金蟾药业股份有限公司，安徽 淮北 35000；. 海军军医大学药学院，上海 00433）

老药新用是药物设计的重要途径之一，采用此方法可以获得药物研究所需的先导化合物，迄今为止已有许多成功的案例，特别是在新型冠状病毒肺炎治疗药物研究中采用此策略，获得了很多有价值的药物[1-3]。阿司匹林从发明至今已有百年的历史，最初用于解热、镇痛和抗炎。随着医学科学的发展，在临床上发现阿司匹林的新用途，能够抑制血小板的聚集，抑制心脑血管疾病的发生[4-5]。因此，从上市药物中寻找新的适应证或将其作为先导物进行结构优化的老药新用设计方法成为药物研究的有效手段[6-7]。

1 仪器与试剂

实验所用试剂均为分析纯；6 种药物原料药：苄普地尔、保泰松、阿洛西林、盐酸氮䓬斯汀、盐酸多沙普伦、美芬洛酮（南京多点化工有限公司）；还原型辅酶Ⅱ(NADPH，东京化学工业有限公司)；混合人肝微粒体(美国BD Gentest 公司）。

Biotek Synergy H2 多功能酶标仪、MK-2 全自动酶标仪、戴安公司Ultimate3000 液相色谱系统(包括三元输液泵、柱温箱、自动进样器和真空脱气机)和AB 公司4000Q-Trap 型串联质谱仪，配有电喷雾电离源，以及AB 公司Analyst (version 1.5.1)、LightSight (version 2.2.1)数据采集及分析软件。

2 实验方法

2.1 p53-MDM2 蛋白结合抑制活性测试[8]

将荧光肽(PMDM-F，Anaspec)用缓冲溶液(100 mmol/L 磷酸钾、0.02%叠氮化钠、100 μg/ml牛丙种球蛋白，用蒸馏水定容至500 ml，pH 7.5)稀释至10 nmol/L，加入到梯度稀释的MDM2 癌基因蛋白中，30ºC 避光孵育30 min。荧光各向异性值用Biotek Synergy H2 多功能酶标仪读取，蛋白结合常数根据荧光各向异性值用Mathematica 9 软件拟合得到。……