王军，何长生，王维，王倩，周迎春

（安徽省动物疫病预防与控制中心合肥 230091）

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）强毒株引起的、以感染禽类为主的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病[1]，具有很高的发病率和死亡率，在全球范围内广泛流行，曾在世界范围内引起三次大的流行，给养禽业造成了巨大的经济损失，严重影响了养禽业的发展，该病与高致病性禽流感并列为世界公认的最重要的2 个禽类疫病[2,3]。世界动物卫生组织（OIE）将新城疫列为A 类疫病，我国将其列入一类动物疫病[4]。

目前检测新城疫病毒的常用方法为荧光定量RT-PCR，该方法比常规的检测方法用时少、周期短、灵敏、准确、特异性强、操作简便[5]，且不易引起污染，还可用于病毒的定量分析。在检测过程中，提取核酸是关键环节，因为提取后的核酸质量及其完整性会直接影响到后续试验结果[6]。本研究选用实验室常用的磁珠法和柱式法提取病毒核酸进行荧光定量RT-PCR 检测，发现两种提取方法在灵敏度及重复性等方面存在差异。现将研究结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器与设备King Fisher Flex 96 通道全自动核酸提取仪，微量移液器，MIKRO 200R 高速冷冻离心机，BIO-RAD CFX Connect 荧光定量PCR 仪。

1.1.2 检测试剂新城疫病毒荧光RT-PCR 试剂盒，购自深圳澳东检验检测科技有限公司，批号：66080；病毒核酸（RNA）抽提试剂盒（离心柱式），购自深圳澳东检验检测科技有限公司，批号：69015；病毒核酸提取试剂（磁珠法），购自广州和实生物技术有限公司，批号：CZD00412。

1.1.3 样品2020 年主要禽病流行病学调查及监测中，筛查出的新城疫阳性样品（鸡咽泄拭子和环境拭子），共22 份。……