姚静，王继安，唐瀛，吴卫东，李州

（1.菏泽市动物疫病预防控制中心山东菏泽 274000；2.鄄城县畜牧服务中心山东菏泽 274600；3.山东省菏泽市食品药品检验检测研究院山东菏泽 274000）

板芩金荞口服液是根据中医辨证理论，通过大量反复实践研发的新兽药，主要由板蓝根、鱼腥草、黄芩、金荞麦等十一味药材组成，具有清热解毒、利尿通淋、健脾补肾、提高机体免疫力之功效[1,2]，对肾型鸡传染性支气管炎有很好的防治效果。本试验采用正交试验设计，以干膏收率、（R，S）-告依春、黄芩苷的含量为指标，对提取工艺进行优选，旨在建立更科学、更有效的提取工艺，为板芩金荞口服液申报新兽药提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器安捷伦1100 型高效液相色谱仪；HH-2 型恒温水浴锅（江苏金坛江南仪器厂）；ME104 型电子天平（梅特勒-托利多）；202 型电热恒温鼓风干燥箱（潍坊精鹰）；YZN50 动态热回流提取浓缩煎药机（宏图药化）。

1.1.2 材料板蓝根、鱼腥草、黄芩、金荞麦等十一味中药材均购自菏泽市医药公司药材批发部，经鉴定均符合《中华人民共和国兽药典》2015 年版有关规定；（R，S）-告依春（批号111753-201603）及黄芩苷对照品（批号110715-201602）均购自中国食品药品检定研究院，水为超纯水，甲醇等为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 口服液水提工艺考察按照处方比例分别称取各药材9份，按表1 黄芩热浸后混同群药一起进行动态热回流提取[3]，主要考察提取次数、提取时间、加水量3 个因素，并选择三个水平进行L9（34）正交试验，以干膏收率、（R，S）-告依春、黄芩苷含量为评价指标，筛选最佳提取工艺条件，因素水平见表1。

表1 因素水平表

1.2.2 板蓝根的含量测定色谱条件：色谱柱为安捷伦C18（300mm×4.0mm，10μm），以甲醇-磷酸溶液（10:90:0.02）为流动相；检测波长为245nm；流速为1.0mL/min；柱温为室温，理论板数按（R，S）-告依春峰计算应不低于5,000[4]。

对照品溶液的制备：取（R，S）-告依春对照品适量，精密称量，加甲醇制成每1mL含40μg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取本品2mL，置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

1.2.3 黄芩苷的含量测定色谱条件：色谱柱为安捷伦C18（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-水-磷酸（45:55:0.6）为流动相；流速为1.0mL/min；紫外检测波长为278nm；柱温为室温，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2,000[5]。

对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，置100mL容量瓶中，加甲醇适量，超声振荡使溶解，放至室温，用50%甲醇稀释制成每1mL含80μg 的溶液。

供试品溶液的制备：精密量取本品2mL，置100mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定，即得。

2 结果

2.1 口服液水提工艺考察

结果见表2、3。由直观分析表明，各因素对提取效果的因素大小顺序为加水量＞提取次数＞提取时间，经方差分析，加水量对提取效果有极显著影响（P＜0.01）；而提取次数和提取时间对提取效果的影响较小，各水平间差异不显著，考虑到大生产需要节约时间和能源，降低成本，提取工艺确定A2B2C3，为药材加12 倍量水提取2 次，2h/ 次。

2.2 验证性试验结果

按照处方比例分别称取各药材3 份，根据正交试验确定的最佳提取工艺，即黄芩热浸后混同群药材加12 倍量水动态热回流提取2 次，2h/ 次，进行放大验证试验，结果见表4。3 批样品的平均干膏收率为27.8%，RED 为0.40%；（R，S）-告依春的平均含量为

表2 正交试验结果

表3 方差分析

4 工艺验证结果

3 讨论

中药有效成分复杂，提取工艺路线的设计关系到中药制剂的质量及临床疗效，不当的提取工艺不仅耗时长、有效成分含量低、提取效率不高，而且会影响临床疗效，是复方中药制剂的关键技术[6]。本研究所选处方中板蓝根清热解毒，辅以黄芩增强其消肿利咽之功效，为本制剂的君药，现代药理学研究表明，（R，S）-告依春是板蓝根主要抗病毒活性成分[7]，黄芩苷是黄芩中的主要药效活性成分[8]，干膏收率是中药提取的一个重要指标，在一定程度上反映药材的优劣，因此本研究将干膏收率、（R，S）-告依春、黄芩苷含量作为工艺考察的评价指标，通过正交试验设计筛选最佳提取工艺，同时考虑生产成本，最终得到板芩金荞口服液最佳提取工艺。本研究为板芩金荞口服液的规模化生产提供了基础，为新兽药申报奠定了数据基础。