牛晓方，高一军，怀宝刚，尹二彦，马腾洲，李克明，黄利敏，王 培，侯明超，姜伟洲

（1菏泽市立医院，山东 菏泽 274031；2平邑县中医医院，山东 平邑273300；3山东省中医药研究院，山东 济南250014；4潍坊市中医医院，山东 潍坊 261041）

牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.），中药称之为“牡丹皮”，具有清热凉血，活血化瘀的功效，是一味临床常用的中药材，其中黄酮类成分含量相对较高，其具有抗病毒、抗氧化及抗疲劳、抗癌和预防骨质疏松等作用[1-3]。本文采用醇提法测定6 个不同产地的牡丹叶总黄酮含量，以期为不同产地牡丹叶中黄酮类成分研究提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料U-1800 型紫外分光光度计（日本Hitachi公司）；SB25-12DTDN 超声清洗机（宁波新芝科技股份有限公司）；Metter Toledo EL2401 电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。牡丹叶(产地分别为1号地山东菏泽、2 号地山西运城、3 号地甘肃武威、4 号地安徽亳州、5 号地四川垫江、6 号地安徽铜陵；芦丁对照品（中国食品药品检定研究所，批号B20771，纯度98%以上）；亚硝酸钠、无水乙醇、氢氧化钠等试剂均为分析纯。

1.2 方法（1）黄酮测定方法：芦丁与Al3+产生黄色络合物，在NaNO2的碱性溶液中呈现橙红色，在波长400～600 nm 有一最大吸收波长。根据朗伯比尔定律，当波长和强度一定的入射光通过光程长度固定的有色溶液时，吸光度A 和物质浓度C 呈正比，计算浓度。（2）对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品5 mg，置10 mL 容量瓶中，加60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成浓度为500 μg/mL 的芦丁对照品溶液。（3）样品的制备：取不同产地牡丹叶样品，粉碎后称约1g，置100mL锥形瓶中，加入60%乙醇30 mL，密塞，称定重量，80℃水浴加热处理2 h，放冷后再称定重量，滤过，用60%乙醇定容至100 mL。（4）检测方法：精密吸取供试品溶液0.5 mL，置于10 mL 比色管中，依次加入0.5 mL5%NaNO2，放置5 min后加入0.5 mL10% Al(NO3)3，6 min 后再加入4 mL NaOH 溶液，60%乙醇稀释至刻度，放置10 min 后，以空白溶液作为参比溶液，在510 nm处测定吸光度(A)。

2 结果

2.1 总黄酮含量测定结果1～6 号总黄酮含量分别为：（175.91±3.56）μg/g、（为127.79±2.27）μg/g、（89.31±3.22）μg/g、（100.56±3.82）μg/g、（79.93±1.73）μg/g及（124.52±4.28）μg/g。

2.2 线性关系 芦丁标准溶液的浓度在100～500 μg/mL范围内，吸光度与峰面积具有良好的线性关系。

2.2 精密度、稳定性及重复性试验（1）精密度：1～6号吸光度分别为0.173、0.176、0.177、0.176、0.175 及0.176，RSD 为0.79%，表明仪器精密度良好。（2）稳定性：1～6 号吸光度分别为0.169、0.171、0.172、0.172、0.173及0.175，RSD为1.16%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。（3）重复实验：1～6 号吸光度分别为0.165、0.167、0.172、0.170、0.168 及0.171 吸光度的RSD为1.56%，该方法重复性良好。

2.5 加样回收率 平均回收率为102.66%，RSD 为1.78%，表明该方法准确性良好。见表1。

表1 加样回收率

3 讨论

研究发现牡丹叶中含有黄酮、多糖、多酚、芍药苷等多种活性成分[4]，而又以黄酮类成分含量较高，黄酮类成分在临床上具有较高的应用价值，因而牡丹叶的开发利用价值较高，本研究测定6种不同产地牡丹叶中总黄酮的含量，确定总黄酮含量最高的样地，对于后期牡丹叶的综合开发利用具有十分重要的意义。本实验选用60%的乙醇溶液提取样品中的总黄酮成分，结果显示，该方法能较好的提取样品中的总黄酮成分，并能准确快速地对样品中的总黄酮进行测定。同时，不同产地的牡丹叶中总黄酮的含量存在差异，其中以1号样地的牡丹叶总黄酮含量最高，并且优势明显，后面依次排列为为2号样地，6号样地，4号样地，3号样地，以5号样地含量最低，提示在牡丹叶总黄酮的开发利用过程中可着重考虑1 号样地。