余 琴 陈昌谊 龚 瑶

1.重庆市九龙坡区人民医院(401329)；2.重庆医科大学附属第一医院

宫颈癌在妇科恶性肿瘤中发病率位居第二，而死亡率居首位[1]。手术、化学疗法和放射疗法是目前常用治疗方法。微小RNA(miRNA)是短调控RNA，通过与目标基因转录本的互补位点结合翻译抑制控制基因表达[2]。研究发现，miR-331-3p在多种肿瘤发生中起抑制作用，在肝癌细胞株(HepG2、SMMC-7721、Bel-7402等)中表达下调，miR-331-3p通过下调E2F1促进肝癌细胞增殖和迁移，且随着肝癌细胞株侵袭转移程度增加表达下调[3]。本研究通过探讨miR-331-3p靶向神经纤毛蛋白-2(NRP2)对宫颈癌细胞增殖、迁移以及侵袭的影响，为临床靶向治疗宫颈癌提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1主要实验试剂人正常宫颈上皮细胞HcerEpic、人宫颈癌HeLa细胞系(美国ATCC细胞库)，10%胎牛血清(美国Clark Bioscience公司)，胰蛋白酶(含EDTA)(美国Gibco公司)，miR-331-3p、NRP2质粒和各引物序列(广州市锐博生物科技有限公司)，50 U/ml青霉素-链霉素、RIPA裂解液、Trizol试剂和BCA试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)，Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司)，兔来源单克隆一抗NRP2、PCNA、MMP-2、MMP-9、GAPDH和山羊抗兔单克隆二抗(美国Abcam公司)，逆转录试剂盒及SYBR GreenPCR Master Mix 试剂盒(TaKaRa公司)，Transwell小室、F12培养基(美国BD公司)，ECL发光液、双荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国Promega公司)。

1.1.2主要仪器实时荧光定量PCR仪、ECL发光仪(Bio-Rad公司)，低温高速离心机(Thermo公司)，倒置光学显微镜和成像系统(Nikon)，酶标仪(Servicebio)，ABI 7900序列检测系统上的Premix Ex TaqTM(TaKaRa公司)。

1.2 建立细胞模型及分组

人宫颈癌HeLa细胞加入含有50 U/ml青霉素-链霉素和10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，并在37℃ 5% CO2培养箱中孵育。根据转染不同将HeLa细胞分为对照组、mimic NC组、miR-331-3p mimic组、siRNA NC组、si-NRP2组、miR-331-3p mimic+NRP2组。……