周向宇 潘 坤 刘 杰 王锋尖*

（1汉江师范学院化学与环境工程学院，湖北十堰 442000；2 十堰市农业科学院食用菌研究所，湖北十堰 442000）

全世界约有侧耳属50种，目前我国包括野生及引种栽培的已知种类为36种，是侧耳属真菌种类资源较为丰富的国家之一[1]。肺形侧耳（Pleurotus pulmonarius）属于蘑菇纲（Agaricomycetes）、蘑菇目（Agaricales）、侧耳科（Pleurotaceae）、侧耳属（Pleurotus）[2]，我国广东、广西、河南、吉林、陕西、西藏、新疆等省（区）均有分布，夏季生长在枯死的阔叶树或倒木上[3]。研究表明，肺形侧耳多糖具有抗癌活性[4]。目前肺形侧耳已被列入第十一批《中华人民共和国农业植物品种保护名录》[5]。肺形侧耳子实体形态受环境影响较大，从牛头山采集的子实体形态与文献报道[3，6-8]存在一定差异，故对其进行分离培养及出菇试验，为开发利用该菌株提供参考。

1 材料与方法

1.1 供试肺形侧耳菌株

图1 野生肺形侧耳子实体

野生肺形侧耳子实体（图1）于2015年采自湖北省十堰市牛头山国家森林公园，采集人王锋尖，采集时间2015 年9 月19 日，采集地东经110°43′，51.7″、北纬32°36′04.7″，海拔439 m。采集标本存放于汉江师范学院真菌标本室（HMHNU），标本号HMHNU1049。菌株由子实体组织分离得到，保存于汉江师范学院菌种库。该菌株由汉江师范学院王锋尖根据宏观形态、显微结构特征初步鉴定为肺形侧耳。经ITS序列分析（图2），并在Gen Bank运用Blast进行同源性比对，得出，与侧耳属的肺形侧耳最大同源性高达99.84%，结合宏观形态、显微结构鉴定为肺形侧耳（Pleurotus pulmonarius）。

图2 采集野生肺形侧耳菌株的ITS区域碱基序列

1.2 试验方法

1.2.1 培养温度试验

培养基配方为马铃薯200 g，葡萄糖20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L［9］。

取7 mm菌块接入上述培养基平皿正中，每组4个平行，分别置于15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃恒温培养箱中。参照高洋等[10]的方法，每天观察菌丝长势，测量菌丝生长量，计算菌丝平均生长速度。

1.2.2 培养基pH试验

培养基配方同1.2.1。分别用1 mol/L HCl 和1 mol/L NaOH 调节培养基酸碱度，pH 分别为5、6、7、8、9，共5 组，每组4 个平行。接种后于25 ℃恒温培养箱中培养。菌丝生长考察方法同1.2.1。

1.3 碳源试验

试验用碳源分别为葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、淀粉。培养基中其他成分同温度试验，每组4个平行。接种后于25 ℃恒温培养箱中培养。菌丝生长考察方法同1.2.1。

1.4 氮源试验

试验用氮源分别为酵母浸粉、尿素、蛋白胨、硝酸铵。培养基中其他成分同温度试验，每组4 个平行。接种后于25 ℃恒温培养箱中培养。菌丝生长考察方法同1.2.1。

1.5 栽培试验

栽培料配方为：木屑68%，棉籽壳20%，麸皮10%，白砂糖1%，石膏粉1%。料含水量为60%～65%。

取15 cm×30 cm 聚丙烯袋，装入搅拌均匀的湿料约800g。共4 袋，121 ℃灭菌2 h。取5 个7 mm的菌块接入料袋，放入25 ℃恒温培养箱中培养。待菌丝长满袋后，移入温室大棚，温度20～25 ℃、空气相对湿度95%催蕾。记录菌丝长势、菌丝长满菌袋的天数，采收子实体，计算生物学效率。

2 结果与分析

2.1 培养温度对试验肺形侧耳菌株菌丝生长的影响

由表1 可知，试验肺形侧耳菌株菌丝在15～40 ℃均可生长。不同试验温度的菌丝平均生长速度排序：25 ℃＞30 ℃＞35 ℃＞20 ℃＞40 ℃＞15 ℃。不同温度培养的菌丝生长速度均呈现出显著性差异。培养温度为25 ℃、30 ℃时菌丝长势浓密。可见在试验温度范围内25 ℃为该肺形侧耳菌株菌丝培养最适温度，30 ℃次之。

表1 培养温度对试验肺形侧耳菌株菌丝生长的影响

2.2 pH对试验肺形侧耳菌株菌丝生长的影响

由表2 可知，在pH5～9 培养基上试验肺形侧耳菌株菌丝均可生长，供试pH 间菌丝平均长速有差异。试验pH 培养基上菌丝平均长速排序：pH6＞pH7＞pH8＞pH9＞pH5。pH6 与pH5，pH7 与pH5，pH8与pH5，pH6 与pH8，pH6 与pH9，pH7 与pH9 培养基中的菌丝平均长速有显著的差异，pH6 与pH7 培养基中的菌丝平均长速差异不显著。所有菌丝长势均较密。可见在试验pH 范围内，培养基最适pH 为6～7。

表2 pH对试验肺形侧耳菌株菌丝生长的影响

2.3 供试碳源对试验肺形侧耳菌株菌丝生长的影响

由表3 可知，试验肺形侧耳菌株在试验用5 种碳源培养基上菌丝均可生长，不同碳源的培养基上菌丝平均长速有差异。试验碳源培养基上菌丝生长速度排序：淀粉＞蔗糖＞甘露醇＞葡萄糖＞乳糖。蔗糖与甘露醇为碳源的培养基上菌丝平均长速差异不显著。淀粉与其他4 种碳源，蔗糖与乳糖、葡萄糖，甘露醇与葡糖糖、乳糖，葡萄糖与乳糖为碳源的培养基上菌丝平均长速差异显著；乳糖为碳源培养基上菌丝相比其他碳源稀疏。可见试验最适碳源为淀粉，蔗糖、甘露醇次之。

表3 供试碳源对试验肺形侧耳菌株菌丝生长的影响

2.4 供试氮源对试验肺形侧耳菌株菌丝生长的影响

由表4 可知，试验肺形侧耳菌株在供试氮源培养基上菌丝均可生长，不同氮源的培养基上菌丝平均长速有差异。试验氮源培养基上菌丝平均长速排序：蛋白胨＞酵母浸粉＞硝酸铵＞尿素。蛋白胨与酵母浸粉为氮源的培养基上菌丝平均长速差异不显著，硝酸铵与尿素，蛋白胨与尿素，酵母浸粉与尿素为氮源的培养基上菌丝平均长速均呈显著性差异；硝酸铵为氮源的培养基上菌丝比其他氮源稀疏。蛋白胨为试验最佳氮源。

表4 供试氮源对试验肺形侧耳菌株菌丝生长的影响

2.5 栽培结果

栽培袋接种28 d 后菌丝长满袋，继续培养3d后形成原基，5 d 后形成子实体，即可采摘（图3）。第一潮子实体鲜重268.5 g，在50 ℃条件下烘干至恒重，得到子实体干重39.6 g，生物学效率为86.06%。肺形侧耳野生子实体与人工袋栽子实体形态存在显著差异，应为野生环境刺激肺形侧耳子实体形态结构发生了变化。

图3 人工栽培的肺形侧耳子实体（左为背面，右为正面）

3 小结

野生肺形侧耳菌株分离培养菌丝体结果表明，该菌株菌丝体最适生长条件：培养温度为25 ℃、培养基pH6～7、碳源为淀粉、氮源为蛋白胨。菌丝培养最适温度、最适pH、最适氮源与兰玉菲等[11]、钟丽娟等[12]、王广维等[13]结果较为一致。尿素作为唯一氮源时菌丝可以生长，与钟丽娟等[12]、王广维等[13]试验结果不同。最适碳源与王广维等[13]获得结果一致，与兰玉菲等[11]、钟丽娟等[12]得到的结果不同。试验结果与前人研究有差异，可能与供试菌株以及基础培养基配方差异有一定关系。

人工栽培长出的子实体与野生标本子实体形态存在显著差异，更具观赏性。