刁艳君，杨 柳，苏明权，郝晓柯，刘家云

（空军军医大学第一附属医院检验科，陕西 西安 710032）

严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARSCoV-2）可引起新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19），目前已在全球范围内广泛流行。疫情暴发初期，因发展迅速，对疑似患者进行快速确诊是防治COVID-19的关键，部分获批的核酸检测试剂研发时间短，存在性能确认仓促、试剂优化不充分以及批间差异大等问题；各临床实验室在开展核酸检测过程的各个环节中存在的问题也可能影响核酸检测结果的准确性。本文将围绕目前SARS-CoV-2核酸检测中的关键环节及要点进行评述，并对实验室核酸检测与临床不符假阴性和复检阳性的问题进行分析。

1 SARS-CoV-2核酸检测的原理

SARS-CoV-2是一种RNA病毒，基因组序列约29 kb，拥有10个基因，可有效编码10个蛋白。病毒由RNA和蛋白构成，最外层是由脂质和糖蛋白组成的包膜外衣，里面蛋白衣壳将RNA包裹在其中，从而使容易降解的RNA得到保护（图1）。病毒通过特定细胞表面受体入侵细胞造成感染，并利用宿主细胞进行复制。病毒核酸检测的原理就是通过细胞裂解液，让病毒的RNA裸露出来，然后用实时荧光逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）进行检测。检测原理最关键的是利用引物和探针来实现核酸序列的“靶向匹配”，即寻找SARS-CoV-2约3万个碱基中区别于其他病毒的核酸序列（与其他病毒核酸相似度“低”的区域），设计引物和探针。引物和探针与SARSCoV-2核酸特定区域高度匹配，即特异性很强，一但待检样本实时荧光RT-PCR扩增结果为阳性，则证明该样本中存在SARS-CoV-2。……