冯长海

（上海皓信生物科技有限公司，上海 201109）

曲霉属是临床常见的一类条件致病性真菌，可根据其形态、生理和系统发育特征进行鉴定与分类，形态学由真菌的菌落特征及其镜下结构特征组成，其中分生孢子头的形状，小梗单层还是双层，梗茎、顶囊、小梗及孢子的颜色、大小、形状、质地，是否存在壳细胞、闭囊壳、子囊和子囊孢子是曲霉的重要镜下结构特征，也是鉴定曲霉的重要依据。黄柄曲霉是少数可产粉孢子的曲霉[1-2]，可导致免疫功能不全儿童感染引发皮肤曲霉病，还可引起骨髓炎、耳真菌病、甲真菌病和椎间盘炎等[2-3]。本研究采用自制玻片进行黄柄曲霉的小培养试验，探讨改良小培养技术在黄柄曲霉微观形态学观察中的价值。

1 材料和方法

1.1 材料

乳酸酚棉兰、PDA培养基（英国Oxoid公司），离心管（50 mL规格）、无菌水、小培养玻片和一次性无菌加样枪头（上海皓信生物科技有限公司），实验用黄柄曲霉（上海市公共卫生临床中心赠送），黄柄曲霉标准菌株KP281443株序列相似度100%（北京睿博兴科生物技术有限公司测序）。

1.2 方法

将实验用黄柄曲霉菌株接种在PDA培养基上，室温培养，待菌株成熟后备用。将小培养玻片凹面朝上，放置于生物安全柜内台面上，紫外线照射30 min后备用。用加样枪吸取已融化的PDA培养基25 μL注入在玻片中央凹槽，待琼脂凝固后，在中央凹槽红点处接种黄柄曲霉，盖上盖玻片，在盖玻片蓝点处用固封剂固定盖玻片。将接种了菌株的玻片平放于内含1滴蒸馏水的50 mL离心管中，25 ℃条件下培养。……