袁 东，蒋瑶娜，李亚清

(1.蚌埠医学院 研究生院，安徽 蚌埠 233030;2.浙江中医药大学 第二临床医学院，浙江 杭州 310053;3.浙江省人民医院 呼吸内科，浙江 杭州 310014)

支气管上皮细胞在维持气道稳态中具有重要作用，其受到病原微生物等多种外界因素刺激以后，细胞凋亡水平升高，导致支气管上皮细胞功能异常，引起疾病发生[1]。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革兰阴性菌的细胞壁组成部分，其可以诱导支气管上皮细胞凋亡[2]。微RNA(microRNA，miRNA)是一类具有多种生物学作用的小分子RNA，其在自然界的多种真核生物体内表达，并且miRNA在不同的生理和病理阶段发挥的作用可能不同[3]。miRNA参与感染性疾病诱导的支气管上皮细胞损伤发生[4]。miR-29b属于miR-29成员之一，与细胞增殖、分化、代谢、衰老和凋亡等有关[5]。miR-29b与人类疾病发生有关，miR-29b可能是疾病治疗的分子靶点[6]。既往研究证实，miR-29b与呼吸系统疾病有关，其参与调控气道上皮细胞重塑过程，miR-29b能够抑制细胞损伤[9]。目前对miR-29b在LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡中的作用还不明确。本研究以人支气管上皮细胞系16HBE作为体外研究对象，以LPS体外诱导16HBE细胞为凋亡模型，探讨miR-29b对支气管上皮细胞凋亡的影响，为靶向分子治疗支气管上皮细胞损伤提供可能思路。

1 材料与方法

1.1 材料

人支气管上皮细胞系(human bronchial epithelial cell line,16HBE)(北京北纳创联生物技术研究院)；pcDNA-CHOP、pcDNA[和元生物技术(上海)股份有限公司]；剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3，c-caspase-3)抗体(Abcam公司)(CTS公司)；mimics control、miR-29b mimics(上海吉玛制药技术有限公司)；Lipofectamine 2000(Invitrogen公司)；miR Vana miRNA提取试剂盒(Ambion公司)；miRNA qRT-PCR试剂盒(Clontech 公司)；CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein C/EBP,CHOP)抗体(北京百奥莱博科技有限公司)；……