李信佳 廖友明 利汉其 白翠芬

【摘要】 目的：探討中性粒细胞CD64、PCT、CRP对重症手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）早期诊断的临床意义。方法：回顾性分析2017年1月-2020年11月佛山市南海区人民医院收治的110例HFMD患儿的诊疗情况，其中重症患儿40例、轻症患儿70例，所有患儿均在入院第1天测定中性粒细胞CD64、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CA16）。分析患儿CD64、CRP、PCT检测临床诊断效能，并比较两组患儿CD64、CRP、PCT水平以及EV71和CA16的感染情况。结果：CD64灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、均高于CPR和PCT（P<0.05）;重症组患儿CD64、CRP、PCT水平分别为（15.38±3.19）MFI、（23.67±3.04）mg/L、（12.37±0.18）ng/mL，均高于轻症组的（10.46±2.33）MFI，（11.47±2.11）mg/L、（5.84±0.09）ng/mL（P<0.05）;重症组患儿EV71阳性率高达87.50%，高于轻症组24.28%（P<0.05）;重症组患儿CA16阳性率为22.50%，与轻症组18.57%比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：CD64、CRP、PCT和EV71在重症手足口病患儿中具有诊断价值，可作为重症手足口病的常规检查项目，有助于筛查可疑的重症手足口病。

【关键词】 中性粒细胞 CD64 C反应蛋白 降钙素原 肠道病毒71型 重症手足口病

[Abstract] Objective： To explore the clinical significance of neutrophil CD64， procalcitonin （PCT）， C-reactive protein （CRP） in the early diagnosis of severe hand， foot and mouth disease （HFMD）. Method： A retrospective analysis of the diagnosis and treatment of 110 children with HFMD admitted to the People’s Hospital of Nanhai District， Foshan City from January 2017 to November 2020. 40 were severely ill children and 70 were mildly ill children. On the first day of admission， neutrophil CD64， PCT， CRP， enterovirus 71 （EV71） and Coxsackie virus A16 （CA16） were measured. The clinical diagnostic efficacy of CD64， CRP and PCT was analyzed， and the levels of CD64， CRP and PCT as well as the infection of EV71 and CA16 were compared between the two groups. Result： The sensitivity， specificity， positive predictive value， negative predictive value of CD64 were higher than those of CPR and PCT （P<0.05）; the levels of CD64， CRP and PCT in severe group were （15.38±3.19） MFI， （23.67±3.04） mg/L and （12.37±0.18） ng/mL， respectively， which were higher than （10.46±2.33） MFI， （11.47±2.11） mg/L， （5.84±0.09） ng/mL in mild group （P<0.05）; the positive rate of EV71 in the severe group was 87.50%， which was higher than 24.28% in the mild group （P<0.05）; the positive rate of CA16 in the severe group was 22.50%， compared with 18.57% in the mild group， there was no significant difference （P>0.05）. Conclusion： CD64， CRP， PCT and EV71 have diagnostic value in children with severe HFMD， and can be used as routine examination items for severe HFMD， which can help to screen suspected severe HFMD.

[Key words] Neutrophil CD64 C-reactive protein Procalcitonin EV71 Hand， foot and mouth disease

First-author’s address： The People’s Hospital of Nanhai District in Foshan City， Foshan 528200， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.17.040

手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是目前儿科最常见的一种急性传染病，是以手、足、口腔、臀部等部位出现斑丘疹或者疱疹为主要特征的疾病，有时膝关节以及肘关节出现皮疹，可能伴有发热症状。其主要的传染途径是粪、口传播或亲密接触，好发于夏季[1-2]。5岁及以下的婴幼儿常多发，传染性强，短时间内可形成局部流行现象。该病多数患儿预后良好，一般情况下可在7 d左右恢复，但少数病情严重的患儿容易出现脑膜炎、心肌炎、神经源肺水肿[3-4]。重症病例早期无特异性检查，临床表现不典型，病情进展迅速，一旦出现肺水肿、肺出血等引发心肺功能衰竭，会在短时间内死亡[5]。该病的主要致病病原菌是病毒，包括柯萨奇病毒和肠道病毒71型（EV71）。目前手足口病尚缺乏轻症和重症病例诊断的具体量化标准。本研究是在本院手足口病患儿中全面开展中性粒细胞CD64作为常规的筛查项目，同时结合患儿的血常规、C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）及临床表现，尽早筛查出可疑的重症手足口病患儿，加强临床观察及护理，避免病情进一步发展。现将研究结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2017年1月-2020年11月佛山市南海区人民医院收治的110例手足口病患儿的诊疗情况。按照病情的轻重程度，将患儿分为轻症组（70例）和重症组（40例）。诊断标准：普通病例、重症病例HFMD符合临床诊断，病原学诊断标准参考中华人民共和国卫生部制定2018年版《手足口病诊疗指南》[6]。纳入标准：符合诊断标准;入院前均未使用抗生素。排除标准：合并其他细菌感染、败血症、脓毒血症以及合并肝肾疾病、血液系统疾病的患儿。本研究通过医院伦理委员会批准，所有患儿家属均自愿参加，并签署知情同意书。

1.2 方法 （1）所有患儿均在入院第1天抽血，分离血清，完成中性粒细胞CD64、PCT、CRP检查。CD64表达水平=CD64平均荧光强度-对照平均荧光强度;CD64≥12.5 MFI为重症手足口病诊断标准，PCT≥12 ng/mL为重症手足口病诊断标准，CRP≥15 mg/L为重症手足口病诊断标准。CD64采用流式细胞仪（生产厂家：美国贝克曼库尔特有限公司，型号：EPICS XL4-MCL）和PE-CD64单克隆抗体试剂盒进行测定，取流式检测管2支，一支流式专用试管中加入10 μL用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的CD64鼠抗人单克隆抗体CD64，另加同型对照品，再加入全血60 μL，混匀后室温20 ℃左右，避光20 min，在Q-PREP上溶血，室温固定10 min后，置流式细胞仪上测定。检测时根据前向角（FS）和侧向角（SS）散射光信号设门在中性粒细胞群，上机时获取每份样本的细胞数为设门内的细胞在10 000个以上，测定CD64的平均荧光强度（median fluores-cence intensity，MFI）。PCT采用vidas 30自動免疫荧光测定仪（法国梅里埃公司）进行测定。CRP定量检测，采用免疫荧光分析仪（韩国i-CHROMA Reader）进行检测。（2）采集标本及促凝血血清，采用上海科华公司的通用型肠道病毒EV71及CA16核酸检测试剂盒检测患儿感染EV71和柯萨奇病毒A16（Coxsackie virus A16，CA16）。试剂解冻后，配置反应液，离心后按20 μL/管置于PCR管中，将患者血清样本RNA加入各PCR管中，进行PCR反应检测。灭菌双蒸水为阴性对照，阳性核酸作为阳性模板RNA。Ct值无数值的样本为阴性，Ct值≤35的样本为阳性。（3）计算特异度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值，其中灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%;特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%;阳性预测值=真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数）×100%;阴性预测值=真阴性例数/（真阴性例数+假阴性例数）×100%。

1.3 统计学处理 所有结果均根据SPSS 20.0软件进行统计学处理，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 重症组，男23例，女17例;年龄0.7～7岁，平均（3.19±0.43）岁;病程1～6 d，平均（3.71±0.52）d;住院时间1～7 d，平均（4.19±0.61）d;轻症组，男39例，女31例;年龄0.8～8岁，平均（3.21±0.41）岁;病程1～6 d，平均（3.58±0.49）d;住院时间1～8 d，平均（4.21±0.59）d。两组患儿的性别、年龄、病程、住院时间比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 CD64、CRP、PCT检测轻、重症手足口病患儿临床诊断效能比较 CD64灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于CPR和PCT，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1～4。

2.3 两组患儿CD64、CRP、PCT水平比较 重症组患儿CD64、CRP、PCT水平均高于轻症组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表5。

2.4 两组患儿EV71和CA16感染情况比较 重症组患儿EV71阳性率显著高于轻症组，差异有统计学意义（P<0.05）;重症组患儿CA16阳性率与轻症组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表6。

3 讨论

手足口病具有普遍性和较大的危害性，2018年我国报告了199万余例手足口病患者，其中死亡129例。重症病例早期无特异性检查，临床表现不典型，患儿病情进展迅速，一旦出现心肺功能衰竭，可短时间内死亡[7-11]。目前，临床上治疗手足口病以抗病毒、抗感染为主，并不能通过使用安全有效的疫苗来预防。手足口病预防控制指南中也仅从血糖升高和白细胞升高的程度来判定该病的普通和重症病例症状。临床医生多通过病例积累的经验对病情进行主观判断，而缺少具体量化的标准。从而可能延误手足口病病情，不利于预后[12]。因此，如何早期识别出重症病例，采取相应措施，是减少危重症手足口病的病死率和后遗症的关键[13]。

CD64是IgG的Fc段受体，主要分布于淋巴细胞、巨噬细胞、单核细胞和树突状细胞表面，其表达受细胞因子的调节，正常情况下CD64在中性粒细胞表面表达，如脂多糖和补体物质等，或接触一些细胞因子，如粒细胞集落因子（G-CSF）、γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）和肿瘤坏死因子（TNF）时，中性粒细胞CD64表达调高[14-15]。一般中性粒细胞在刺激因子刺激4～6 h，其CD64表达大量增高，22 h达高峰，24 h内灵敏度、特异度高。大量表达的CD64与其配体结合后，启动并放大免疫反应，包括吞噬作用、抗体依赖细胞介导细胞毒作用和细胞因子的释放。目前针对重症手足口病患儿早期临床表现不明显，缺乏早期诊断依据。本研究主要内容是在本院手足口病患儿中全面开展CD64作为常规的筛查项目，尽早筛查出可疑的重症手足口病患儿，加强临床观察及护理，避免进一步加重[16-17]。Sidbury等[18]研究指出，PCT是诊断细菌感染性疾病的指标之一，其在病毒感染及健康人群中呈低水平表达，血PCT的定量检测在鉴别诊断细菌性和非细菌性感染方面有较高的特异度。本研究结果显示，重症组患儿CD64水平为（15.38±3.19）MFI，较轻症患儿（10.46±2.33）MFI显著升高（P<0.05），说明CD64水平变化更快更明显。

CRP是一种敏感的急性时相蛋白，由肝细胞在炎症因子IL-1、干扰素、TNF等刺激下生成，可与肺炎球菌细胞壁的C-多糖结合。CRP生成后，通常在炎症反应发生12 h后出现急剧升高，持续高水平状态24～48 h，对炎症有一定的指示作用，稳定性和精确度较高，已经作为感染检测指标广泛应用于临床，在诊断感染方面发挥着不可替代的作用。但是CRP易受机体影响，如机体在创伤、手術等出现应激反应时，CRP的水平也会明显增高，且其临床实时判断的效果较差[19-20]。故不适用于作为手足口病疾病诊断的指标。PCT是降钙素前体物质，也是诊断感染的重要指标之一，尤其在判断细菌性和非细菌性感染方面有较高的特异度。正常状态下，在人体血清中几乎检测不出，当机体处于病理状态下时，受到严重的细菌感染、真菌感染、寄生虫感染或脓毒症等刺激，肝细胞、脾细胞以及甲状腺C细胞分泌PCT，使其在血清中的水平升高。但局部轻度感染或自身免疫障碍时，PCT在血清中不会升高，临床上检测其水平能反映全身炎症的活跃程度[21-22]。Fang等[23]研究表明，在细菌感染4 h后，血清中PCT水平开始升高，6～8 h达到高峰，24 h内持续保持高水平状态。

本文研究结果显示，CD64的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于CPR和PCT（P<0.05）;重症组患儿CD64、CRP、PCT水平均显著高于轻症组（P<0.05），说明CD64具有更高的诊断价值。另针对手足口病患儿的EV71型及CA16型进行了分析，旨在了解手足口病患儿对于EV71和CA16的易感性。研究结果显示，重症组患儿EV71的感染率高于轻症组（P<0.05），而两组的CA16感染率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。由此可见，对于手足口病患儿检测EV71更值得关注。本研究通过评估检查结果与病情严重程度的关系，分析CD64、PCT、CRP、EV71对重症手足口病早期诊断的临床意义，及时进行干预，防止重症手足口病进一步加重，减少危重症和病死率。

综上所述，CD64、CRP、PCT和EV71在重症手足口病患儿中具有诊断价值，可作为手足口病的常规检查项目，有助于筛查可疑的重症手足口病。

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（收稿日期：2021-04-26） （本文编辑：张爽）