罗传皊，孙利平，戚成栋 *

(枣庄矿业集团中心医院 1.重症医学科；2.小儿内科，山东 枣庄 277100)

肺部的很多疾病都是与肺部的炎性反应密切相关，尤其是脓毒血症肺损伤[1-2]。近期有报道称，非编码RNA (non-coding RNA，ncRNA)能够调控脓毒血症肺损伤的肺泡巨噬细胞炎性小体的释放[3]。长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)转移相关肺腺癌转录本1 (metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1)，又称核富集丰富转录本2 (nuclear enrichment enriched transcripts 2，NEAT2)，是一种高度保守的非编码RNA (non-coding RNA，ncRNA)，被认为是肺癌转移和进展的预后生物标志物[4-5]。已有研究报道，lnc-MALAT1(lncRNA-MALAT1)被认为是肺部炎性损伤的重要预后因素[6]。本研究旨在探究lnc-MALAT1调控LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎性反应的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

大鼠肺泡巨噬细胞系(alveolar macrophages,AMOs)(ATCC公司)；F12K培养基(Invitrogen公司)；胎牛血清(杭州四季青生物技术公司)；人白介素1β(interleukin-1β，IL-1β)检测试剂盒、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)检测试剂盒、双荧光素酶报告实验试剂盒(上海碧云天生物公司)；RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation，RIP)实验试剂盒(广州伯信生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞的培养及分组处理：用F12K培养基培养(20%胎牛血清+1%青链霉素)在37 ℃、95% O2、5% CO2的条件下培养、传代NR8383细胞。将正常培养的AMOs随机分为对照组(正常培养细胞)、LPS组(1 mg/L的LPS处理12 h)，下列各组转染后均进行1 mg/L的LPS处理12 h，pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-MALAT1组(转染pcDNA-MALAT1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-217组(转染miR-217 mimics)、pcDNA-MALAT1+miR-NC组(共转染pcDNA-MALAT1和miR-NC)、pcDNA-MALAT1+miR-217组(共转染pcDNA-MALAT1和miR-217 mimics)。

1.2.2 ELISA实验检测炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的含量：收集待检测细胞的上清液，按照人白介素1β(IL-1β)检测试剂盒、肿瘤坏死因子α(TNF-α)检测试剂盒的说明书要求检测其中IL-1β、TNF-α的含量。

1.2.3 RT-qPCR实验检测MALAT1、miR-217的表达量：用RNA提取试剂盒提取需要检测的细胞中的总RNA，再将其反转录为cDNA。按照RT-qPCR试剂盒的要求检测cDNA中MALAT1、miR-217的表达，结果以GAPDH、U6为内参，2-△△Ct法计算MALAT1、miR-217的表达。……