史方海陈忠仁

(海口市人民医院呼吸内科,海口 570208)

肺纤维化是肺慢性炎症的主要危害,例如慢性阻塞性肺疾病或哮喘,气道慢性炎症促使局部大量的促纤维化生长因子分泌[1],成纤维细胞增生并向肌原成纤维细胞分化,重塑气道,诱发肺脏间质纤维化,最终导致患者肺功能的损害,可见阻止成纤维细胞增生以及气道重建是干预肺慢性炎症肺功能危害的关键[2]。罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)是过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)激动剂,临床使用中发现RGZ 还具有具有抗炎、调节免疫的功效[3],有研究显示RGZ 可以抑制肺部炎症,发挥肺损伤保护作用[4-5]。p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein ki-nase,p38MAPK)通路是生物体内重要的信号转导通路,在成纤维细胞的增殖分化中也发挥着重要作用[6]。本研究观察了RGZ 对肺成纤维细胞增殖的影响,并探讨p38MAPK 通路在其中的作用。

1 材料和方法

1.1 实验细胞

人胚肺成纤维细胞株(human embryonic lung fibroblast,HELF)购自中国科学院上海细胞库。

1.2 主要试剂与仪器

RGZ 购自太极集团重庆涪陵制药厂;青霉素、链霉素、转化生长因子-β1(TGF-β1)、碘化丙啶(PI)购于美国Sigma 公司;胎牛血清购自杭州四季青生物技术材料研究所;胰蛋白酶、高糖DMEM 干粉培养基购自美国Gibco 公司;细胞计数试剂盒(CCK-8)购自北京全式金生物技术公司;蛋白裂解液、Bradford 蛋白定量试剂盒购自南京凯基生物技术公司;I 型胶原蛋白(Col I)、III 型胶原蛋白(Col III)、P-p38MAPK、p38MAPK 抗体购自美国Santa Cruz 公司;MK3 多功能酶标仪、细胞培养箱为美国Thermo Fisher 公司产品;流式细胞仪为美国Beckman Coulter 公司产品。

1.3 实验方法

1.3.1 细胞培养和实验分组

HELF 细胞于37℃、5% CO2环境下,培养于10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 mg/mL 链霉素的DMEM 培养液中,细胞融合达80%～90%时胰酶消化传代。……