张 英 宋晓红 郭海云

1.河北省张家口市妇幼保健院(075000)；2.北京世纪坛医院

miRNA是一类非编码的单链小分子RNA[1]。通过基因调控参加真核细胞生物学翻译过程。由于肿瘤与miRNA联系紧密，肿瘤miRNA研究成为热点[2-5]。以往研究显示，肝癌、胰腺癌等与miR-183在组织中的异常应答可能有紧密关联[3-5]。为探究miR-183的异常应答在卵巢癌发生发展中的影响，本研究对卵巢癌细胞中miR-183的表达水平和过表达对卵巢癌细胞的影响分析，探讨mir-183在卵巢癌发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象

经本院伦理委员会同意，选取本院2018年9月-2020年9月卵巢癌组织切片和其邻近组织切片标本40例,癌组织细胞为卵巢癌组织内细胞，癌旁组织细胞为卵巢癌组织范围2cm处没有癌变或坏死组织。患者手术前3个月没有接受任何药物或其他相关的抗癌治疗，均签署知情同意书。

1.2 细胞株以及试剂

中国科学院上海细胞库购进人卵巢腺癌细胞(SKOV3)和人卵巢癌细胞(OVCAR3)；上海素尔生物科技有限公司购入SH30809的RPMI-1640细胞培养基、SH30033的DMEM培养基、SH30084的胎牛血清(FBS)、SH30042的0.25%胰蛋白酶、SH30256的10xPBS；美国应用生物系统公司购买4366596的Taqman microRNA逆转录试剂盒、4324018的Taqman通用PCR主混合物；美国英杰生命技术有限公司购入15596-026的Trizol试剂、11668027的Lipofectamine 2000转染试剂；美国BD 公司购入556547的膜联蛋白v-fitc/pi凋亡检测试剂盒；西格玛奥德里奇公司购入M2128的噻唑蓝。

1.3 细胞培养以及转染

细胞培养：从液氮罐中取出两株SKOV3和OVCAR3细胞复苏，1200r/min离心3min弃上清，用1ml10% FBS的RPMI-1640培养基混匀，置培养瓶中，37℃ 5%CO2培养孵育。当细胞密度70%～80%时传代培养。细胞转染：合成MIR-183类似物和阴性对照类似物(表1)，严格按照美国英杰生命技术有限公司Lipofectamine 2000转染试剂说明进行细胞转染。……