汪一村，徐 东，陆欢华，沈卫星，王晓亮，吴伟新

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是一种临床上高病死率的原发性肝癌，是全球排名第3位癌症相关死亡原因。中国肿瘤登记中心最新公布的癌症统计数据显示：2015年新发恶性肿瘤约429万例，死亡人数约281万；其中肝癌新发病例约46.61万，死亡人数约42.21万例，严重威胁人类的生命与健康。近期诸多外显子组和全基因组测序对肝癌的遗传机制研究提供了广泛的数据，然而，目前已鉴定出的候选基因的生物学功能在很大程度上仍是未知的。跨膜蛋白6超家族成员2（transmembrane 6 superfamily member2，TM6SF2）位于19号染色体上，为7～10次跨膜蛋白，表达具有一定的组织特异性，主要分布于肝脏、小肠、脑组织和肾脏中。已有高通量测序数据分析表明TM6SF2在肝癌中低表达，但对其发挥作用的具体机制缺乏深入报道。该研究基于TM6SF2在肝癌中的表达特点并分析与预后关系的基础上，旨在研究其在肝癌细胞发挥功能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 组织样本与主要试剂

1.1.1 病例资料与实验细胞 选取2016年10月—2018年12月复旦大学附属中山医院HCC手术患者，共计15例，取肝癌组织（非坏死区肿瘤组织，大小约为0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm）及癌旁组织（距肿瘤边缘2 cm的肝硬化组织，大小约0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm）。所有新鲜组织获取后立即转入液氮固定。肝癌细胞系Hep G2及正常肝细胞L-02购自中科院上海细胞库。

1.1.2 主要试剂 TM6SF2（ab169629）、内参 GAPDH（ab181602）一抗抗体购自英国 Abcam公司；高效RIPA裂解液（组织／细胞）、BCA蛋白浓度测定试剂盒、Transwell小室购自北京索莱宝科技有限公司；CCK-8试剂盒、Annexin V-FITC／PI双染细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；……