舒见威，黄春霞，张 丽，胡宪文

失血性休克是临床常见的危重症之一，再灌注后因恢复供氧而产生的过量自由基，对神经细胞的损害主要涉及DNA损伤，如果机体不能有效修复DNA损伤，则可导致细胞突变积累甚至凋亡。SIRT1是NAD依赖的赖氨酸脱乙酰化酶，可以通过调节细胞转录过程，进而影响DNA的损伤修复、细胞凋亡等生物过程。新近研究发现SIRT1可通过影响 PARP1活性参与核 DNA损伤的修复，使PGC1α脱乙酰基参与调控线粒体稳态。七氟醚是挥发性全身吸入性麻醉药，其预处理或者早期后处理对缺血性脑损伤有着直接的神经保护作用，然而七氟醚发挥神经保护作用具体机制尚未研究清楚。该课题组前期研究表明，七氟醚后处理可以抑制线粒体通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore，MPTP）的开放，减少凋亡相关蛋白从线粒体释放到细胞胞质，减轻神经元凋亡，进而改善失血性休克复苏引起大鼠的空间学习与记忆能力损伤。该研究拟利用HT22细胞系，建立氧糖剥夺／复氧复糖（oxygen and glucose deprivation／reoxygenation，OGD／R）模型模拟体内的失血性休克复苏过程，以探究七氟醚后处理对 OGD／R诱导的HT22细胞DNA损伤及凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 HT22细胞系购于武汉普诺塞（Procell）公司。

1.1.2 试剂 胎牛血清（货号S711-002S），购自Lonsera公司；DMEM培养基购自Hyclone公司；七氟醚（货号：83291），购自艾伯维公司；RIPA裂解液（货号：P0013B），BCA试剂盒（货号：P0012），购自Beyotime公司；β-actin单克隆抗体 （货号：66009IIg），购自Proteintech公司；SIRT1单克隆抗体（货号：9475S），购自美国 Cell Signaling Technology公司；ECL显影液（货号：34095），购自美国Thermo公司。

1.1.3 仪器 CO细胞培养箱（Thermo公司），细胞缺氧小室（加拿大 Stem Cell公司）；气体浓度监测仪（深圳迈瑞生物公司）；……