韩永洁，王兴国，邓 璐，杜蔚蔚

口腔癌是全球最常见的十种癌症之一，尽管研究和治疗不断取得新的进展，但在过去几年中生存率并未显著提高。化疗是治疗口腔癌的主要方法之一，然而肿瘤细胞对化疗药物产生的耐药性是影响该方法疗效的主要难题。肿瘤多重耐药有着复杂的机制，多重耐药基因（multidrug resistance gene 1，MDR1）表达产生的 P糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）是其中的关键因子。c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK），在诸多文献中报道了其与多重耐药性的关系，基于JNK1的靶向治疗有望成为新的治疗方案。

微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一种长度约为23个碱基的小分子单链RNA，对机体的基因表达调控具有重要作用，广泛运用于恶性肿瘤的早期诊断和靶向治疗。通过生物信息学预测，miR-33-5p与JNK1存在可能的靶向结合位点，因此，该研究拟通过人舌鳞癌细胞株CAL-27构建耐药细胞株，研究miR-33-5p靶向JNK1对耐药细胞的作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞培养 人舌鳞癌细胞株CAL-27（中国科学院上海细胞库），在5% CO的37℃环境温度下，培养于10%胎牛血清和1%青链霉素的DMEM培养基中。

1.1.2 主要试剂 DMEM培养基、胎牛血清购自美国 Hyclone公司，卡铂（carboplatin，CBP）、顺铂（cisplatin，DDP）、紫杉醇（paclitaxel，PTX）、5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）购自齐鲁制药有限公司，Trizol试剂、RIPA试剂、BCA试剂盒、MTT试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，Taqman miRNA RT及universal master mix试剂盒购自美国Applied Biosystems公司，lipofectamine 2000试剂购自美国Thermo Fisher公司，荧光素酶报告试剂盒购自美国Promega公司，Rh123试剂购自美国 Sigma公司，miR-33-5p mimic及其 inhibitor、scramble inhibitor由上海吉玛制药技术有限公司合成，引物由北京擎科生物科技有限公司合成，实验所用一抗购自英国Abcam公司，二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司。……