轮状病毒通过STAT3磷酸化对肠道炎症的影响及机制研究
2021-03-16张晓燕章孝成何茂章黄升海
张晓燕,章孝成,丁 锐,何茂章,黄升海,
轮状病毒(rotavirus,RV)是呼肠孤病毒科的一组分节段的双链RNA病毒,也是引起全球范围内婴幼儿腹泻的最常见病原体之一。RV通过粪口途径传播,主要感染的部位是小肠上部或小肠上皮细胞,严重者会累及整个小肠,其主要在绒毛顶端柱状上皮细胞内复制。肠道炎症近年来备受关注,白细胞介素-22(interleukin-22,IL-22)在肠道炎症的发生和发展中表现出双面性。研究表明,在小肠的十二指肠段和回肠的隐窝处有一类特化的肠道上皮细胞为潘氏细胞(Paneth),一方面它为肠道上皮干细胞提供干细胞壁龛,另一方面它会分泌抗菌肽RegⅢ-γ进入肠道黏液屏障,调节肠道炎症,而信号转导转录激活因子3(STAT3)的磷酸化是RegⅢ-γ发挥作用的重要因素。研究还发现,肠道上皮细胞表面存在IL-22受体,IL-22与其结合后可以激活STAT3。因此该研究采用 RV灌胃感染7日龄BALB/c乳鼠,运用Western blot、ELISA检测相关蛋白 STAT3、pSTAT3、RegⅢ-γ和IL-22的表达情况,探讨RV通过STAT3磷酸化对肠道炎症的影响及其具体机制。
1 材料与方法
1.1 细胞株与病毒株 恒河猴胚胎肾细胞MA104细胞株,轮状病毒RV VR2018病毒株均购自中科院武汉病毒研究所,本课题组自行增殖、保存。病毒复苏后在MA104细胞上进行增殖,经测定RV病毒的TCID为 10/0.1 ml。
1.2 实验动物 SPF级BALB/c小鼠36只,7~8周龄,其中24只雄鼠、12只雌鼠,由安徽省实验动物中心提供,饲养于独立送风隔离笼具系统内,该系统由安徽医科大学基础医学院动物房提供,等级为P2级。待雌雄鼠自行配种生产乳鼠,随机选取250只7日龄BALB/c乳鼠,体质量3.5~4.0 g,用于实验。
1.3 动物模型建立与实验分组 将自行配种生产的SPF级7日龄BALB/c乳鼠随机分成5组,每组50只,分别为:(1)正常对照组:不经任何处理;……
