江 玉，孙 磊，张 英，陈 颍，张晓慧，颜士杰，肖 兰

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是女性生殖系统常见高度恶性肿瘤之一，病死率位居各妇科肿瘤首位，全球每年有超过14万的卵巢癌相关死亡病例。化疗耐药是卵巢癌高致死率的重要因素之一，目前发生机制尚不十分明确。肿瘤微环境理论认为，肿瘤微环境（tumor microenvironment，TME）和细胞外基质是肿瘤对化疗反应的重要决定因素。肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）作为 TME中重要基质细胞，分泌可溶性因子如促血管生成因子、基质金属蛋白酶、细胞因子等，促进肿瘤生长、血管生成、浸润和转移，并增加肿瘤耐药性。研究已证实CAFs参与调节多种恶性肿瘤耐药，而CAFs在EOC化疗耐药中作用及其机制目前仍不明确。该研究在成功分离培养原代人 CAFs、正常成纤维细胞（normal fibroblasts，NFs）的基础上，将CAFs与EOC细胞系SKOV3细胞建立间接共培养体系，观察CAFs在EOC细胞顺铂耐药中的作用，并探讨其可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与标本 DMEM培养基、PBS购自美国Hyclone公司；胎牛血清购自德国GIBGO公司；TRIzol试剂购自美国InvitroGen公司；逆转录试剂盒、RT-PCR试剂盒购自 TaKaRa公司；CCK8试剂盒、活性氧（reactive oxygen species，ROS）测定试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒购自上海碧云天公司；α-SMA与FAP抗体分别购自英国abcam及美国CST公司；YAP、CTGF、Cyr61抗体分别购自美国CST公司、英国abcam公司。选取2019年7—12月在安徽医科大学第一附属医院进行手术切除的10例EOC患者的新鲜卵巢癌肿瘤组织标本，患者年龄40～60岁，术前未行放化疗及免疫治疗，术中临床分期Ⅱ～Ⅳ期，术后病理诊断为EOC；对应收集同期40～60岁因良性疾病（子宫肌瘤）行全子宫双附件切除患者新鲜上皮性卵巢组织标本。……