段惠娟 褚洪迁 孔成成 戴广明 曹廷明 孙照刚

结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)试验广泛用于结核病流行病学调查、卡介苗(BCG)接种检测、结核病筛查，以及结核病临床诊断等方面。但由于PPD是多种抗原的混合物，其结果受到BCG接种及其他分枝杆菌感染的影响，诊断特异度低[1]。因此，在BCG普遍接种的地区，PPD试验用于结核分枝杆菌(MTB)感染检测受到了较大限制。近年来，利用结核分枝杆菌复合群(MTBC)中不同细菌[如MTB、牛分枝杆菌或BCG基因组中存在的缺失片段(RD区)]的特异性，为开发新的高特异性诊断试剂提供了研究方向[2]。目前，重组结核杆菌融合蛋白(EC)[结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)重组融合蛋白]已作为新型MTB感染皮肤试验的检测试剂通过了国家药品监督管理局药品审批而准予上市[3]，能有效区分MTB感染和BCG接种。除此之外，对MPT64、Rv1985c、Rv0222、Rv3117及Rv3120等相关蛋白的研究表明，它们在结核病血清学诊断方面具有一定的潜力[4-7]，但用于MTB感染皮肤试验鲜有报道。本研究筛选并表达了来自RD1、RD2、RD4、RD5、RD7、RD9、RD11区及MTB休眠相关抗原的12种重组抗原，以了解这些抗原用于MTB感染皮肤试验的诊断效果。

材料和方法

一、实验菌株

MTB标准株(H37Rv，ATCC27294)由首都医科大学附属北京胸科医院北京结核病临床数据和样本资源库提供，接种在中性改良罗氏培养基上放入37 ℃培养箱中培养3～4周。

二、实验动物

无特定病原体(specific pathogen free，SPF)级豚鼠，雌性，体质量250～300 g，共18只，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2016-0011。

三、皮肤试验抗原

1.标准品：50 IU TB-PPD(产品批号：20190510)购自北京祥瑞生物制品有限公司。……