刘晨阳 张成 杨婕 孙韬

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor，EGFR-TKI)作为EGFR阳性肺癌患者治疗的一线靶向用药，能显著延长晚期患者生存时间，改善患者生活质量。然而EGFR-TKI抵抗的形成，严重影响了其疗效[1]，其形成的机制复杂，涉及EGFR突变、c-Myc基因扩增及肿瘤干细胞等。非编码RNA作为表观遗传的重要执行者，与恶性肿瘤的发生发展密切相关。成熟的miRNA通过与其互补的mRNA结合，进而促进靶mRNA的降解或抑制其翻译[2]。miR-145可靶向c-Myc、Oct4及AKT等原癌基因，在多种恶性肿瘤中发挥抑癌作用[3-5]，因此，揭示miR-145的调控机制对于肿瘤的早期诊断及治疗方案的评估至关重要，长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是长度>200nt的非编码RNA，其可作为内源竞争RNA(competing endogenous RNAs，ceRNA)，抑制miRNA的生物学效应，参与调控肿瘤细胞的恶性行为及药物抵抗[6-7]。本研究通过生物信息技术发现，与miR-145潜在结合的lncRNA LINC00628，并对其与miR-145的结合作用及与肺腺癌细胞EGFR-TKI抵抗的关系进行了探究。

资料与方法

一、实验材料

1 实验细胞及试剂 人肺腺癌细胞系PC9(上海生科院细胞资源中心)，RPMI-1640培养基及胎牛血清(FBS，美国Gibco)，吉非替尼(Gefitinib，美国MCE)，LINC00628 小干扰RNA(small interference RNA LINC00628，siLINC)及随机序列对照表达载体(上海吉凯基因)，LINC00628过表达载体、miR-145过表达载体及空白载体(上海汉恒生物)，合成miR-145 NC及mimics(上海汉恒生物科技)，转染试剂Lipofectamine 2000(美国Thermo Fisher)，psiCHECK2载体及Luciferase Assay Reagent II试剂盒(美国Promega)，CCK-8试剂(日本同仁化学)，RNAiso Plus、PrimeScript RT reagent Kit及SYBR Green I(日本Takara)，GAPDH、c-Myc及AKT抗体(美国Proteintech)。

2 临床组织来源 收集2019年7月至2019年12月我院普胸外科54例肺腺癌患者肿瘤组织及癌旁组织，取材后取部分组织置于液氮罐中保存，54例患者中男性30例，女性24例；年龄36～71岁，中位年龄51岁；包……