李晓丹 原翔 刘怡文 李治岐 万里新

肺腺癌(lung adenocarcinoma cancer，LAC)是非小细胞肺癌的常见病理组织学类型之一，[1-3]患者预后较差，临床五年生存率在10%～15%[4]。鳞状细胞癌扩增基因1(Gene Amplified in Squamous Cell carcinoma 1,GASC1)，也称KDM4C， 在食管癌、乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤及髓母细胞瘤等多种肿瘤中都有高频扩增或异常高表达，并且与肿瘤的恶性程度密切相关，表现为导致细胞永生化，增强癌细胞的侵袭性，与不良预后相关[5-9]然而目前尚没有研究评估GASC1作为生物指标与肺腺癌预后之间的关系，因此本研究拟通过分析100例肺腺癌组织GASC1的表达情况，评估其临床意义及预后价值，为临床肺腺癌的诊疗提供新的思路。

资料与方法

一、研究对象及标本

100例肺腺癌组织标本，均来自2016年1月至2016年11月南阳市中心医院胸外科接受手术治疗的肺腺癌患者。其中男53例，女47例；<60岁37例，≥60岁63例；有吸烟史36例，无吸烟史64例；高分化、中分化和低分化分别有28、56与16例；有淋巴结转移者37例，无转移者63例；TNM分期为Ⅰ/Ⅱ和Ⅲ期者分别有63例与37例。患者均为初次接受治疗。该项目经过南阳市中心医院伦理委员会的同意，并于术前获得患者书面知情同意。

二、免疫组化

组织蜡块切片经二甲苯脱蜡、乙醇梯度脱水，柠檬酸盐修复液微波加热修复，免疫组化S-P超敏试剂盒(美国R&D公司)检测标本组织GASC1(抗鼠单克隆抗体1 ∶200，abcam)表达，室温孵育、PBS冲洗，苏朩素复染、酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。GASC1为胞核和胞质出现棕黄色颗粒。随机挑选5个高倍镜视野，根据染色强度(0分，浅黄色；1分，棕黄色；2分，棕褐色；3分，深褐色)和阳性细胞百分比(0分，≥0%且<5%；1分，≥5%且<25%；2分，≥25%且<50%；3分，≥50%且<75%；4分≥75%)的乘积对每个视野进行免疫组化综合评分：0分为阴性；1～12为阳性，5个视野免疫组化评分均值为最终结果。

三、GASC1 mRNA检测

用液氮将肺腺癌及癌旁组织标本冷冻后，用石臼研磨呈粉末状，用Trizol法提取RNA，后将1 μg RNA进行反转录，根据试剂盒(北京鼎国)步骤合成cDNA，根据Q-PCR(诺唯赞)试剂盒步骤检测GASC1 mRNA相对表达量。GASC1引物序列为：上游5′-TGGATCCCAGATAGCAATGA-3′，下游5′-TGTCTTCAAATCGCATGTCA-3′；内参GAPDH引物序列为：上游5′-GCCACATCGCTCAGACACC-3′，下游 5′-GATGGCAACAATATCCACTTTACC-3′。……