狄海红 冯未萍 王凤姣

临床上卵巢癌患者的多器官功能衰竭风险可超过15%以上，同时患者的远期生存预后恶化程度较高[1-2]。有研究指出，在卵巢癌病情发展的过程中，细胞因子或者肿瘤蛋白表达异常，进而影响了卵巢生发上皮细胞的异常病变，从而促进卵巢肿瘤的发生发展。环氧化酶-2(COX-2)是氧化酶家族成员，能够通过影响到卵巢癌细胞的增殖速度，提高了卵巢癌细胞的转录激活程度，从而促进癌细胞的持续性自我扩增效应[3]；CD44变异性V6(CD44V6)是跨膜糖蛋白，能够通过诱导癌细胞粘附和浸润，增强癌细胞对于基膜组织的突破能力，进而促进卵巢癌的发生发展[4]。部分研究者认为在卵巢癌患者中，COX-2的表达浓度可显著上升[5]，但对于CD44V6的分析不足。本文选取90例卵巢癌标本，探讨了COX-2、CD44V6的表达及其与卵巢癌患者的临床病理特征相关性，并将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集了我院2017年1月至2019年3月的90例卵巢癌标本作为卵巢癌组、45例卵巢良性肿瘤组织标本为良性组。纳入标准：①卵巢癌、卵巢良性肿瘤均以手术后病理学检查结果作为金标准；②诊断标准参考中华医学会制定的标准[6]；③年龄范围19～59岁；④所有纳入对象既往均无放化疗、免疫学治疗史；⑤本研究经医学伦理委员会的批准。排除标准：①伴有全身感染性疾病；②肝肾功能疾病；③长期使用糖皮质激素、免疫抑制剂的患者；④其他部位恶性肿瘤。卵巢癌组，年龄范围33～58岁，平均(46.6±7.0)岁，临床分期：Ⅰ期患者21例、Ⅱ期患者31例、Ⅲ期患者29例、Ⅳ期患者9例；分化程度：高分化患者26例、中分化患者31例、低分化患者33例；发生淋巴结转移阳性55例。良性组，年龄范围36～59岁，平均(48.0±9.4)岁；黏液性囊腺瘤20例、浆液性囊腺瘤16例、成熟畸胎瘤9例。2组患者就上述一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，可进行比较。

1.2 COX-2蛋白、CD44V6蛋白的免疫组化检测方法

将标本石蜡包埋后，行连续性切片厚度为3 m，在温度60 ℃下烤片60 min后脱水，使用EDTA进行抗原修复，加入10 μl蒸馏水及10%过氧化氢5 μl，并在室温下孵育30 min，再采用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次×3 min后，加入P16蛋白的单克隆抗体(1∶1000 购自罗氏检测公司)，37 ℃孵育60 min，PBS洗涤3次×3 min，加入HRP标记的COX-2、CD44V6二抗(1∶2000 购自罗氏公司)，37 ℃孵育20 min，PBS洗涤3次×3 min，加入DAB后，PBS冲洗和复染，脱水后进行仔细观察。

1.3 结果判定

(1)根据着色程度分为：0分-无色、1分-淡黄色、2分-棕黄色、3分-褐色、黑色；(2)根据阳性细胞比例分为：1分-阳性细胞数目所占比例≤10%、2分-阳性细胞所占比例>10%～50%、3分-阳性细胞数>50%～75%、4分-阳性细胞数所占比例>75%。两种积分相乘总分<3分为阴性、≥3分为阳性。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤中的COX-2、CD44V6蛋白表达水平比较

卵巢癌组织中的COX-2蛋白、CD44V6蛋白阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组织，差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 2组COX-2蛋白、CD44V6蛋白表达水平比较(例，%)

2.2 卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤中的COX-2蛋白、CD44V6蛋白表达与恶性指标的关系

不同临床分期、不同分化程度、是否发生淋巴结转移的卵巢癌组织中的COX-2蛋白阳性表达率比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)；不同分化程度、是否发生淋巴结转移的卵巢癌组织中的CD44V6蛋白阳性表达率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 卵巢癌COX-2、CD44V6蛋白表达与肿瘤恶性程度指标的关系(例，%)

3 讨论

不同病理性因素刺激下，卵巢生发上皮细胞或者卵泡细胞的异常病变，均能够促进卵巢癌的发生，在合并有雌激素受体基因突变或者游离雌激素活性改变的群体中，卵巢癌的发病率可进一步的上升[7]。卵巢癌患者的3年及5年生存率不足35%[8]，经不同治疗措施治疗后，卵巢癌患者的病情进展风险仍然较高。临床上对于卵巢癌患者的血清学病情评估具有重要的作用，其能够在协助临床诊疗、预后判断或者出院后随访方面发挥作用。血清糖链抗原125(CA125)虽然在卵巢癌的病情评估或者预后随访中发挥作用，但多中心的临床分析研究发现，单纯依靠CA125评估卵巢癌病情或者预后的灵敏度不超过30%，其评估的一致性较低[9]。本次研究对于卵巢癌患者病灶组织中COX-2、CD44V6的表达分析研究，不仅能够揭示卵巢癌的病情进展原因，同时能够为临床上提供新型的血清学参考指标。

COX-2能够通过诱导环氧化酶的代谢障碍，提高环氧化酶对于卵巢肿瘤微环境的改变，增加卵巢癌细胞的生物学恶化的风险。COX-2蛋白结构上包含的脯氨酸结构，能够结合卵巢癌基因DNA上游转录配体，提高癌细胞核基因转录激活的程度。相关研究还认为，COX-2能够促进肿瘤血管内皮细胞的新生，促进新生血管的形成，进而提高肿瘤细胞的血流灌注水平[10]；CD44V6是CD44蛋白的变异体，其能够通过影响到卵巢癌细胞的上皮-间质转换过程，提高肿瘤细胞的浸润深度，进而促进卵巢癌的病情发展[11-12]。

本次研究对于卵巢癌及卵巢良性肿瘤患者病灶组织中COX-2、CD44V6的分析可见，在卵巢癌患者中，COX-2、CD44V6的表达阳性率明显的上升，高于良性肿瘤组，统计学差异较为显著，提示了COX-2、CD44V6的高表达均能够参与到卵巢癌的发生过程。相关细胞因子的表达对于卵巢癌的发生影响，主要通过下列途径[13-14]：①COX-2的表达能够提高肿瘤血管内皮的迁移速度，促进肿瘤组织血管分子的形成，为肿瘤细胞的浸润提供前提；②CD44V6能够提高卵巢癌细胞的干细胞特性，提高癌细胞对于盆腔内脏器组织的粘附和浸润能力。研究者发现[15]，在卵巢浆液腺癌患者中，CD44V6的表达阳性率或者表达浓度可显著上升，同时在合并有明显的腹水或者远处脏器转移的患者中，CD44V6的表达水平可翻倍上升。分析COX-2、CD44V6的表达与卵巢癌患者临床病理特征相关性可以看出，在临床分期较晚、发生了淋巴结组织转移或者卵巢癌细胞低分化的患者中，COX-2蛋白的表达阳性率较高，提示了COX-2的表达与卵巢癌临床病理特征的关系，这主要由于COX-2的表达上升，能够加剧癌细胞生物学特征的恶化，从而引起肿瘤细胞浸润深度的增加，提高了癌细胞对于盆腔内淋巴结的粘附能力。在癌细胞分化程度较差或者发生淋巴结转移的患者中，CD44V6的表达阳性率较高，提示CD44V6的表达与卵巢癌的临床病理特征同样密切相关，这主要由于CD44V6的表达上升能够促进卵巢癌分化成熟的调控障碍，诱导卵巢癌细胞的低分化，但并未发现临床分期与CD44V6的关系，推测CD44V6的表达并不能影响到卵巢癌细胞的浸润或者转移过程。

综上所述，在卵巢癌患者病灶组织中，COX-2、CD44V6的表达阳性率均明显上升，同时COX-2、CD44V6的表达与卵巢癌患者的临床分期、癌细胞分化及淋巴结转移密切相关。但本次研究未能探讨COX-2、CD44V6的表达与卵巢癌患者的预后关系。