吴东雅 徐括琴 刘 芳 杨小风

在我国，上皮性卵巢癌的发病率占卵巢肿瘤的50%～70%[1]。在临床上，上皮性卵巢癌的恶化速度非常快，病死率非常高[2-3]。相关研究在对患者病情进展机制的研究过程中发现，细胞因子水平变化可以促使卵巢上皮细胞发生异常病变，进而促进卵巢癌的发生和病情进展。yes相关蛋白(YAP1蛋白)的表达可以激活HIPPO的信号通路，从而提高了卵巢上皮细胞的转录活性，促进卵巢上皮细胞的异常核分离过程[4]；转录因子叉头框架蛋白(FOXC1)的表达，能够通过稳定癌细胞的转录基因的活性，降低癌基因的激活程度，进而稳定癌细胞的生物学特征[5]；果蝇基因ft的同源基因(FAT4)的表达上升，能够通过提高细胞的变形能力，促进上皮细胞的粘附和转移，进而促进恶性肿瘤的病情进展[6]。为了揭示FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表达与卵巢恶性肿瘤之间的关系，为临床上对上皮性卵巢癌的诊疗或者预后评估提供参考意见，本文收集了我院在2018年1月至2020年1月期间保存的72例上皮性卵巢癌组织标本进行研究，现将结果进行如下报告。

1 资料与方法

1.1 临床资料

在上皮性卵巢癌组织标本72例中，年龄范围为31～70岁，平均年龄(50.20±1.12)岁。纳入标准如下：①经病理组织学已确诊者；②术前均未行放疗、化疗者；③相关病理资料完整者。排除标准如下：①非初次治疗者；②合并有其他恶性肿瘤者。同时选取正常卵巢组织标本60例，年龄30～68岁，平均年龄49.50岁。

1.2 实验方法

本次研究将石蜡连续性切片后脱蜡至水，然后再H2O2室温下孵育10 min，再用磷酸盐缓冲液冲洗3次(每天3～5 min)，用8%的蛋白粉封闭液(由BSA 购自南京博奥生物科技公司生产)封闭2 h，再倒去封闭液，加入兔来源(浓度1∶1000～1500)一抗，放置于4 ℃冰箱过夜，然后再次用磷酸盐缓冲液冲洗3次(每天3～5 min)，加入鼠来源( 1∶400～500)二抗，放置于室温孵育20～30 min，再次用磷酸盐缓冲液冲洗3次(每天3～5 min)，然后加入辣根酶或碱性磷酸酶作为标记物，放置于室温孵育10 min，再用磷酸盐缓冲液冲洗3次(每天3～5 min)，滴加显色剂(由DAB 购自南京博奥生物科技公司生产)，复染，脱水，封片，完成实验。

1.3 疗效判定

FOXC1、FATA4及YAP1以胞内出血棕黄色颗粒为阳性，采用半定量积分法进行判断，阳性细胞比例：<5%计为0分，5%～25%计为1分，26%～50%计为2分，51%～75%计为3分，>75%计为4分；染色强度：无着色计为0分，淡黄色计为1分，黄色计为2分，棕黄色计为3分；当阳性细胞比例和染色强度得分之积，>4分则为阳性表达。

1.4 统计学方法

本文所得到的计数资料应用SPSS 19.0软件包进行数据分析，行χ2检验，相关性采用Spearman秩相关分析。以P<0.05表示具有统计学差异。

2 结果

2.1 上皮性卵巢癌和正常卵巢组织中FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表达

上皮性卵巢癌组织FOXC1蛋白阳性表达率明显低于正常卵巢组织，具有统计学差异(P<0.05)，而FAT4和YAP1蛋白阳性表达率明显高于正常卵巢组织，具有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 上皮性卵巢癌和正常卵巢组织FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表达(例，%)

2.2 FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表达与卵巢癌临床病理特征关系

Ⅲ期、中低分化及有淋巴结转移患者FOXC1蛋白阳性表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ期、高分化及无淋巴结转移患者，具有统计学差异(P<0.05)；中低分化及有淋巴结转移患者FAT4、YAP1蛋白阳性表达率明显高于高分化及无淋巴结转移患者，具有统计学差异(P<0.05)；Ⅲ期患者YAP1蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者，具有统计学差异(P<0.05)，见表2。

表2 FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系(例，%)

2.3 相关性分析

上皮性卵巢癌组织FOXC1蛋白与FAT4、YAP1蛋白呈负相关(γs=-0.297和-0.294，P<0.05)，FAT4蛋白与YAP1蛋白呈正相关(γs=0.471，P<0.05)。

3 讨论

卵巢一旦出现上皮细胞的异常病变或癌基因的突变，就能够促进使上皮性卵巢癌的发生，尤其剑与见于合并生殖系统恶性肿瘤家族史者，上皮性卵巢癌的发病率会进一步的升高[7]。在临床上，上皮性卵巢癌患者的临床预后整体较差，综合性治疗措施治疗后，很多患者的无瘤生存时间、无进展生存期仍然没有得到改善[8-9]。本文从上皮性卵巢癌患者病灶组织中不同细胞因子和蛋白的表达研究发现：①对于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表达分析研究，能够为临床上卵巢癌患者的血清学肿瘤指标的诊断提供潜在研究指标；②对于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的研究，能够为卵巢癌患者的临床预后的评估提供依据。

FOXC1是叉头转录因子家族成员，其能够通过降低癌基因的激活程度，抑制癌基因转录上游启动子或者增强子的活性，能够降低癌细胞的转录速度，从而抑制癌细胞的持续性自我增殖过程；FAT4是果蝇ft同源基因家族成员，其能够激活癌细胞内不同肿瘤信号的通路，提高癌细胞内AKT或者NF-KB活性，进而促进癌细胞的生物学特征的改变；YAP1蛋白是HIPPO信号通路家族的重要成员，其能够提高HIPPO下游肿瘤相关因子的激活，降低癌细胞的凋亡程度，促使癌细胞周期发生紊乱，导致生殖系统恶性肿瘤的发生[10]。有研究指出，FOXC1蛋白在食管癌或者甲状腺癌患者中表达降低与相关恶性肿瘤的发生存在密切关系[11]，但是对于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表达与卵巢癌的关系研究却很少。

本文对于卵巢癌患者病灶组织中FOXC1、FAT4及YAP1的表达分析进行分析结果显示，在病例组患者中，FOXC1的表达显著下降，低于卵巢良性组织组，而FAT4及YAP1蛋白的表达阳性率均显著上升，远高于卵巢良性组织组，这表明FOXC1、FAT4及YAP1的异常表达可以促进卵巢癌的发生与发展。这可能与FOXC1、FAT4及YAP1以下特性有关[12-14]：①FOXC1的表达下降，失去了其对于癌基因的稳定和沉默作用，导致癌细胞内转录基因的激活程度的提高；②FAT4的升高可以提高卵巢上皮细胞的生物学特征的变化，促使上皮细胞发生异型；③YAP1的上升能够促进HIPPO信号通路的激活，加剧了癌细胞增殖。有研究从卵巢癌病灶组织发现[15-17]，FOXC1蛋白的表达阳性率可平均下降35%以上，尤其是在短期内病情进展速度较快或者远期病死率较高的卵巢癌患者中，FOXC1下降则更加明显。从免疫组化染色结果可见，在癌细胞异型性较为明显的区域，FAT4和YAP1蛋白的染色强度也较深，进一步说明相关细胞因子对于卵巢癌细胞的形态特征的影响。在探讨FOXC1、FAT4及YAP1的表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系中发现，在临床分期和癌细胞分化程度较低或是发生了淋巴结转移的患者中，FOXC1的表达均下降显著，说明FOXC1的表达与卵巢癌患者的临床病理特征密切相关，这主要于FOXC1的表达缺失能够导致癌细胞细胞成熟障碍有关，促进了癌细胞的浸润和粘附过程；中低分化及有淋巴结转移患者FAT4、YAP1蛋白阳性表达率较高，同时在临床分期较晚的患者中，YAP1蛋白的表达阳性率可进一步的升高，说明相关指标与卵巢癌病情的关系，临床上可以通过随访FAT4及YAP1的表达，进而评估卵巢癌的病情。相关分析研究也可见[18-20]，FOXC1、FAT4及YAP1的表达具有显著的相关性，这表明某些指标在影响卵巢上皮细胞恶性肿瘤的病变过程中起着重要的作用。

总之，FOXC1的表达在卵巢癌患者中明显下降，FAT4与YAP1的表达则明显升高，此外相关指标的表达与卵巢癌患者临床分期、癌细胞分化程度或者淋巴结转移密切相关。