陶正贵，杜静虎，田葵，王东华，龚伟，陈满宇*

1湖北文理学院附属医院/襄阳市中心医院普外科，湖北襄阳 441000；2湖北文理学院附属医院/襄阳市中心医院肿瘤科，湖北襄阳 441000

胃癌是一种起源于胃黏膜上皮的常见恶性肿瘤，是全球第二大致死性肿瘤，其发病率呈逐渐增高趋势，仅我国每年就有超过60万新发病例[1]。尽管外科手术、放射疗法和化学疗法等胃癌治疗方法有所进步，但由于多数患者确诊时已处于中晚期，导致其预后较差，目前的远期生存率仍低于30%[2]。因此，探索胃癌诊断的新的标志物及治疗靶标非常重要[3]。轴突导向蛋白4D (semaphorin 4D，Sema4D)又称CD100，是Semaphorin家族成员之一，属于免疫系统的一种跨膜型的同源二聚体糖蛋白[4]。Sema4D在多种肿瘤的增殖、血管生成及转移等过程中发挥重要作用，其表达与肿瘤的进展呈正相关[5-6]。已有研究发现，Sema4D在胃癌中呈高表达，可通过促进肿瘤血管新生而加速胃癌细胞的浸润、转移[7-8]，可作为判定胃癌患者预后的参考。但Sema4D在胃癌中的具体作用机制尚不明确。本研究探讨了沉默Sema4D对胃癌细胞SGC-7901生长、自噬及上皮-间质转化的影响，以期为胃癌的防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器 RPMI 1640培养基(61870-127)、胎牛血清(26400-036)、青链霉素(15140-122)、胰蛋白酶(25200-056)购自美国Gibco公司(Grand Island，NY)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0012S)、LipoRNAiTM转染试剂(C0535)、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(C1062S)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG (A0208)购自上海碧云天生物技术研究所；兔抗Ki-67 (ab15580)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA) (ab18197)、Bax (ab53154)、Bcl-2 (ab196495)、caspase-3 (ab13847)、cleaved caspase-3 (ab2302)、Beclin1 (ab62557)、p62 (ab56416)、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ (ab128025)、E-cadherin (ab15148)、N-cadherin (ab18203)、波形蛋白(ab137321)、GAPDH (ab9485)单克隆抗体购自英国Abcam公司(Cambridge，MA)。Nano-Drop分光光度计购自赛默飞世尔科技公司；……