安学院，丁艳洁，李思源，李 军，常子涛

0 引 言

糖尿病是一种由于胰岛素分泌障碍和(或)胰岛素抵抗而引起的慢性代谢性疾病[1]，其发病率居高不下[2]，根据国际糖尿病联合会,2015估计有4.15亿人年龄在20～79岁糖尿病患者,因糖尿病而导致500万人死亡,全球因糖尿病引起的健康总支出约为6730亿美元。到2040年，预计20～79岁的糖尿病患者人数将增至6.42亿人[3]。无论1型还是2型糖尿病的发病都与胰岛素分泌异常有关[1,4]。β细胞分泌胰岛素的过程受到各种供能物质、激素、多肽和神经递质类等的调控[5]，如肝细胞生长因子、胰升血糖素、胰升血糖素样生长因子等。荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术是一种非辐射的能量转移，可以定时、定量、定位、动态地观察活细胞内蛋白质与蛋白质之间的相互作用[6],FRET具有敏锐度高，检测快捷，无生物毒性等优点[7]，在国内外得到广泛应用。本课题组前期研究发现，胰升血糖素在不同葡萄糖浓度下，均可刺激胰岛β细胞分泌胰岛素[8-10]。本研究通过探讨MIN6细胞在不同浓度葡萄糖及胰升血糖素干预下对第二信使蛋白激酶A(protein kinase A ,PKA)的作用，及对胰岛素分泌的影响，以及添加PKA的刺激剂异丙肾上腺素(isoprenaline hydrochloride,ISO)后，MIN6细胞分泌胰岛素的变化，为研究糖尿病的发病机理和靶向治疗药物的开发提供新的实验室证据。

1 材料与方法

1.1 实验材料小鼠来源的胰岛β细胞瘤株MIN6细胞购自上海拜力生物科技有限公司，PKA的DNA质粒AKR源于John Hopkins University，胎牛血清、β-巯基乙醇、1640培养基粉末购于 GIBCO公司，L-谷氨酰胺、0.25% EDTA-胰蛋白酶液、胰高血糖素粉末购于Sigma公司，青-链霉素液购于北京索莱宝公司，小鼠胰岛素-ELISA试剂盒购于上海西唐生物科技有限公司，质粒大提试剂盒购于QIAGEN公司。……