李长明 邵荣学 邓小梅 赵士杰 王拓 全仁夫

急性脊髓损伤（acute spinal cord injury，ASCI）是一种严重的中枢神经系统损伤，发病率和致残率均较高，常导致受损平面以下运动和感觉功能障碍[1]。ASCI 的主要损伤机制包括轴突的失连、神经细胞的凋亡与坏死等。目前尚无有效的方法治疗ASCI。近年来，组织工程学的兴起为ASCI 的治疗提供了新方向，并取得了不少进展[2-3]，其基本思路是生物支架+种子细胞原位移植于受损脊髓处，提供细胞再生的微环境及通路，以期重塑传导束及促进轴突再生。本研究通过对尿液细胞（urine cell，UC）进行重编程建立诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs），并定向分化为神经干细胞（neural stem cells，NSCs），再将3D 打印支架载iPSCs 分化的NSCs 移植至受损脊髓，探讨3D 打印支架载UC 来源重编程iPSCs 分化的NSCs 对ASCI大鼠的疗效。

1 材料和方法

1.1 实验动物和标本 SPF 级8 周龄雄性SD 大鼠42只，体重（200±10）g；SPF 级5 周龄雄性SD 小鼠14 只，体重（21±3）g；均购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2019-0004。均分笼饲养于屏障环境内，室温20～25 ℃，12 h 光照/12 h 黑暗交替的环境，自由摄食摄水。操作均严格遵守《实验动物管理条例》的相关规定。采集1 例23 岁健康成年男性的尿液作为实验标本，经杭州市萧山区中医院医学伦理委员会审批通过，患者签署知情同意书。

1.2 试剂和仪器 聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）（aladdin P133293）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）（ab53554）、微管蛋白（β-tubulin Ⅲ）（ab52623）、生长相关蛋白43（GAP-43）（ab75810）、巢蛋白（Nestin）（OM264981）、FBS（F8687）均购于美国Sigma 公司；神经元特异性烯醇化酶（NSE）（bs-10445R）购于中国Bioss 公司；原代神经元细胞基础转染（Amaxa Basic Nucleofector）试剂盒（VPI-1003）购于德国Lonza 公司；ALP 检测试剂盒（KL-ALP-Ra）购于上海康朗生物科技有限公司；……