栗永华，刘 伟，徐智凯，刘炜玮，孙英杰，仇旭升，谭 磊，宋翠萍，廖 瑛，丁 铲，孟春春

(中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241)

新城疫(Newcastle disease，ND)是危害我国养禽业的严重疫病之一，新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)主要通过干扰素、TNF途径和caspase途径诱导受感染细胞发生细胞凋亡，从而产生病变效应[1]。p53抑癌蛋白在细胞应激反应和抑制肿瘤恶性发展中起着重要作用，p53蛋白在DNA修复、细胞凋亡[2]、防止肿瘤细胞的增殖[3-4]以及肿瘤的形成[5-7]等方面发挥了重要的作用。

TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子(TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator，TIGAR)的表达降低了细胞内果糖-2，6-二磷酸酶(fructose-2，6-bisphosphatase，F-2，6-P2)的水平，磷酸果糖激酶降低，果糖-6-磷酸(fructose-6-phosphate，F-6-P)水平升高，从而抑制了糖酵解，使6-磷酸葡萄糖(glucose-6-phosphate，G-6-P)进入磷酸戊糖(pentose phosphate pathway，PPP)途径增加[8-9]，降低了细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)的含量[10]，从而减少细胞凋亡和DNA损伤，导致内源性TIGAR表达对p53诱导的细胞死亡产生抑制作用[11]。

有研究表明，TIGAR在皮层神经元预处理后，增加PPP途径，促进还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)和谷胱甘肽(glutathione，GSH)的产生，清除ROS，抑制细胞凋亡从而维持细胞存活[12]。一些研究表明，p53基因通过平衡TIGAR和DRAM具有调节应激诱导凋亡和自噬[13-14]。本研究旨在构建有利于NDV增殖的疫苗候选细胞株，所以选用的细胞是易于NDV增殖的BHK-21细胞，在前人研究的基础上，扩增出鸡TIGAR基因并首次扩增出仓鼠的TIGAR基因，构建稳定表达TIGAR基因的BHK-21细胞系。并评价NDV中强弱毒株在不同细胞系中的增殖滴度，意在比较不同来源的TIGAR基因发挥抗凋亡功能差异。为是否可以借助TIGAR基因构建的稳定过表达细胞系，使NDV在疫苗生产中突破不能体外大量扩增的瓶颈作出新的尝试。……