马彦娟，任 芳，李 闯，陈希妍，杨 平，石金河

(新乡医学院第一附属医院急诊科，河南卫辉 453100)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是一种严重的心脏疾病，是由于急性冠状动脉闭塞后导致的缺血缺氧而引起的心肌细胞死亡[1]。目前，大量研究表明在AMI心肌细胞功能受损和心力衰竭中，炎症和心肌细胞凋亡发挥重要作用[2]。miRNA是一类非编码的长度为19～25个核苷酸的短链RNA，其在细胞的多种功能调节，如分化、增殖、转移和凋亡等中发挥着重要作用[3]。研究显示miRNA-124在AMI患者血清中的表达升高[4]，下调miRNA-124-3p可通过抑制心肌细胞凋亡而发挥对心肌梗死的保护作用[5]。还有研究表明，Wnt信号通路参与调节大鼠心肌梗死模型中的细胞凋亡[6]。miRNA-124-3p是否可通过调节Wnt/β-catenin信号通路发挥心肌细胞凋亡保护作用的研究还未见报道。本研究以H9C2细胞为研究对象，检测缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation，OGD)模型中miRNA-124-3p抑制剂在调控Wnt/β-catenin信号通路中及细胞凋亡的可能作用，为心肌细胞缺血缺氧的治疗提供参考，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

高糖DMEM培养基、低糖DMEM培养基及胎牛血清(美国Gibco公司)；Wnt1 siRNA、阴性对照(negative control，NC)siRNA(美国SANTA Cruz公司)；miRNA-124-3p抑制剂(上海吉玛基因公司)；Lipofectamine 2000转染试剂(美国Invitrogen公司)；Wnt1抗体、β-catenin抗体、p53抗体、Bax抗体、Bcl-2抗体(美国SANTA Cruz公司)；裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)抗体(美国Abcam公司)；GAPDH抗体(美国Sigma公司)；荧光Ⅱ抗(美国LI-COR公司)。

1.2 方法

1.2.1H9C2的培养

大鼠心肌细胞H9C2细胞株(协和细胞库)培养于高糖DMEM培养基(内含10%胎牛血清，100 U/mL青霉素及0.1 mg /mL链霉素)，37 ℃、5% CO2恒温培养箱，2～3 d传代1次。

1.2.2OGD模型的建立及实验细胞分组

正常条件下培养的对数生长期的H9C2细胞，更换成无血清低糖DMEM培养基，1% O2、94% N2、5% CO2恒温培养箱培养48 h，形成OGD模型。……