结核分枝杆菌对miR-21和TLR-4/NF-κB信号通路的影响研究*
2021-02-25林瑶瑶刘海林钟有清
麦 叶,林瑶瑶,刘海林,钟有清
(1.海南省中医院重症医学科,海口 570203;2.海南医学院第一附属医院呼吸内科,海口 570102)
肺结核是1种主要由结核分枝杆菌(Mtb)感染引起的慢性消耗性传染病,在经济欠发达国家和地区,其近年来发病率不断升高,严重威胁人类健康[1]。巨噬细胞可吞噬入侵的Mtb,并呈递抗原,使机体获得特异的抗结核免疫力,但Mtb是典型的细胞内寄生菌,可通过多种机制逃避巨噬细胞的抗微生物作用,在巨噬细胞等宿主免疫细胞内存活和繁殖。研究显示,机体的免疫应答反应抑制Mtb生长,其中90%的病原体潜伏在感染病灶中,进入休眠状态。一旦免疫系统出现异常,休眠状态的Mtb即进入复苏状态,肺结核复发[2]。在肺结核致病及复发过程中,Mtb与巨噬细胞的相互影响发挥重要作用[3]。因此,研究其作用机制对于探讨肺结核的临床治疗具有重要意义。Toll样受体(TLR)是人呼吸道天然免疫中的关键受体,TLR4广泛表达于气道上皮,在呼吸道黏膜免疫中有重要作用,可能参与肺结核发生、发展[4]。有研究报道,微小RNA(miRNA/miR)可调节TLR信号通路[5]。本研究将Mtb感染RAW264.7和THP-1细胞后,对miR-21表达和TLR-4/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响进行分析,旨在研究Mtb与巨噬细胞的相互作用机制,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1菌株与细胞株
RAW264.7和THP-1细胞购自中科院上海细胞库;强毒Mtb H37Rv及弱毒Mtb BCG(牛型结核杆菌减毒株,卡介苗)购自北京生物制品研究所。
1.1.2主要试剂与材料
DMEM培养基、1640培养液、二甲基亚砜(DMSO)购自美国Sigma公司;胎牛血清购自美国Hyclone公司;Trizol试剂、逆转录试剂盒、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)试剂盒购自美国R&D公司;……
