潘鹭翔,贺 维,程柏杨,2,朱茂荣,2,顾锦涛,张 毅*

(1空军军医大学药学系生物制药学教研室,西安 710032;2空军军医大学基础医学院;*通讯作者,E-mail:zhangyi@fmmu.edu.cn)

奥沙利铂(Oxaliplatin, OXA)是第三代铂类抗癌化合物,以铂原子与DNA形成交叉联结对细胞发挥基因毒性作用[1],以奥沙利铂为基础的联合化疗常规应用于晚期和转移性结直肠癌[2]。然而,晚期结肠癌患者常常因肿瘤复发、转移导致治疗的失败,最新研究表明,基因毒性类化疗药物会对肿瘤细胞造成治疗性衰老(therapy-induced-senescence, TIS)[3],其会表现出衰老细胞的特性,并在肿瘤微环境中发挥其功能[4]。其中包括通过衰老分泌相关表型(senescence-associated secretory phenotype, SASP)引起肿瘤的复发、转移[5];通过衰老逃逸导致肿瘤“死而复生”[6];通过改变肿瘤干细胞特性促进肿瘤发展[7]。为了更全面了解化疗致肿瘤细胞衰老,本文旨在构建奥沙利铂处理后结肠癌细胞衰老模型,全面探索衰老结肠癌细胞的表型与特性,为进一步探索衰老结肠癌细胞在肿瘤微环境及肿瘤发生发展过程中的作用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 细胞系和主要试剂

人结肠癌细胞系HCT-116、HT-29为本实验室保存,青霉素链霉素混合液、DMEM高糖培养基及胎牛血清购于美国Gibco公司。培养皿、孔板及共聚焦小皿购于美国CORNING公司。化疗药物奥沙利铂(Oxaliplatin, OXA)购于美国Selleck公司。β-半乳糖苷酶试剂盒购于中国Solarbia公司。抗体p21、β-gal、γ-H2AX、p53、CDK2、p38及p16购于美国Abcam公司,辣根过氧化物酶标记的二抗、荧光二抗及DAB显色液均购自西安壮志生物科技有限公司。EDU检测试剂盒购于上海锐博公司。Trizol试剂购自美国Thermo公司,RNA逆转录试剂盒及荧光定量PCR试剂盒购自日本Takara公司,qRT-PCR引物均由北京擎科生物科技有限公司设计合成。……