胡小秋 郑琴 徐铖

宫颈癌约占女性生殖器官恶性肿瘤的50%以上，其中宫颈鳞状细胞癌约占宫颈癌的75%～80%左右[1]。中晚期宫颈鳞状细胞癌患者临床治疗效果及预后较差，而肿瘤细胞的浸润与转移是影响患者预后的关键因素。p63 与肿瘤细胞的迁移密切相关[2]。p40 是鉴别宫颈鳞癌的一个重要标志物[3]，本次研究旨在探讨宫颈鳞状细胞癌组织中p63 和p40的表达及其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年6 月至2020年6 月期间台州恩泽医疗中心（集团）恩泽医院手术切除的宫颈鳞状细胞癌组织标本83 例，年龄37～69 岁，平均年龄（58.62±9.51）岁；临床分期：Ⅰ期26 例、Ⅱ期35 例、Ⅲ期22 例；分化程度：低分化28 例、中分化34 例、高分化21 例；有淋巴结转移者27 例。纳入标准为：①经病理检查首次确诊为宫颈鳞状细胞癌；②手术前未接受过放化疗治疗；②患者病历资料完整。排除标准为：①合并其他恶性肿瘤者；②手术前已接受过放化疗治疗者；③病历资料不全者。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色法检测p63 和p40 的表达 将收集的石蜡包埋组织制成厚度为2 µm 的石蜡切片，经常规脱蜡及水化后，浸泡于3%过氧化氢溶液中灭活10 min，再加入柠檬酸盐缓冲液加热至100 ℃，维持20 min 左右，以进行抗原修复，磷酸盐缓冲液冲洗3 次，待切片彻底冷却后，按照链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法组织化学试剂盒（由北京中杉金桥公司生产）说明书进行操作，5%羊血清室温孵育15 min，顷去，勿洗，滴加兔抗人p63和兔抗人p40抗体（由美国Cell Signaling Technology公司生产），4 ℃过夜，磷酸盐缓冲液冲洗3 次，每次5 min，滴加生物素标记的羊抗兔二抗，37 ℃孵育30 min，磷酸盐缓冲液冲洗3 次，每次5 min，二氨基联苯胺显色5 min，经自来水充分冲洗后，使用苏木精复染，脱水、中性树脂封片。

1.2.2 免疫组织化学染色结果判定 免疫组织化学染色结果由2 名病理科医生采用盲法进行判定。阳性结果判定标准：以细胞核着色为棕黄色至棕褐色染色为阳性细胞。在100 倍放大视野下随机选取5 个视野进行计数，其中阳性细胞染色强度分级：无色计0 分、淡黄色计1 分、棕黄色计2 分、棕褐色计3 分；阳性细胞数：＜5%计0 分、5%～25%计1 分、26%～50%计2分、＞50%计3分，将2 项得分相乘作为标本免疫组织化学染色结果：0 分为阴性，1～3分为弱阳性，≥4 分为阳性。

1.3 评价指标 分析p63和p40在宫颈鳞状细胞癌中的表达状况，并分析宫颈鳞状细胞癌组织中p63和p40表达与患者临床病理特征的关系以及二者之间的相关性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.00 统计学软件进行数据处理。计数资料采用χ2检验；相关性采用Pearson相关性分析。设P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 p63和p40在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况 在83 例宫颈鳞状细胞癌组织中，呈p63弱阳性或阳性表达者65 例，阳性率为78.31%，呈p40 弱阳性或阳性表达者72 例，阳性率为86.75%，二者均呈弱阳性或阳性表达者53 例，阳性率为63.86%，二者均呈阴性表达者10 例，阴性率为12.05%。p63 和p40在宫颈鳞状细胞癌组织中表达见图1。

图1 p63和p40在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达（苏木精-伊红染色，×200倍）（内文见第23页）

2.2 宫颈鳞状细胞癌组织中p63和p40表达与患者临床病理特征的关系见表1

表1 宫颈鳞状细胞癌组织中p63和p40表达与患者临床病理特征的关系/例（%）

续表表1 宫颈鳞状细胞癌组织中p63和p40表达与患者临床病理特征的关系/例（%）

由表1可见，不同年龄、部位的宫颈鳞状细胞癌患者组织中p63 和p40 的阳性表达无明显差异性（χ2分别=1.17、1.75、0.52、0.71，P均＞0.05），但不同肿瘤大小、临床分期、分化程度、肌层浸润深度及有无淋巴结转移、脉管浸润、宫旁浸润的患者组织中p63和p40的阳性表达存在显著性差异（χ2分别=5.72、23.14、13.10、43.40、53.99、61.36、62.43、6.57、33.73、7.36、35.85、35.87、22.13、50.02，P均＜0.05）。

2.3 宫颈鳞状细胞癌组织中p63和p40表达的相关性 通过免疫组织化学染色评分计算出宫颈鳞状细胞癌组织中p63表达平均分为（2.08±0.58）分，p40表达平均分为（3.54±0.79）分，Pearson相关性分析显示，宫颈鳞状细胞癌组织中p63 与p40 的表达水平呈正相关（r=0.96，P＜0.05）。

3 讨论

近年来尽管随着宫颈癌早期筛查的广泛应用部分患者可以在发病早期即被发现，但宫颈鳞状细胞癌较易发生侵袭与转移[4]，因此，研究宫颈鳞状细胞癌浸润及转移的机制对于提高宫颈鳞状细胞癌的临床诊治意义重大。

p63是p53家族中一员，其是调控表皮细胞进行早期分化的重要因素之一[5]，其作为宫颈鳞状细胞癌的免疫组织化学鉴别检测指标已得到部分学者们的认可。由于p63对宫颈鳞状细胞癌的诊断特异度和灵敏度并不十分理想[6]，因此，探寻其他更为有效的分子标志物显得尤为重要。p40 是p63 蛋白的一种亚型，其在标记鳞状上皮时具有较高的特异性[7]。因此，本次研究分析了宫颈鳞状细胞癌组织中p63和p40的表达，结果显示，在83 例宫颈鳞状细胞癌组织中，p40 的阳性率（86.75%）高于p63 的阳性率（78.31%），且二者均呈弱阳性或阳性表达者53 例，阳性率为63.86%，表明p63 和p40 在宫颈鳞状细胞癌组织中均有较高的阳性表达率，且p40 的阳性表达率更高。

近年来，有研究显示上皮肿瘤患者组织中p63表达降低与不良预后有关[8]。另有研究显示宫颈鳞状细胞癌组织中低水平的p63可导致宫颈鳞状细胞癌恶性程度的进展[9]。但目前有关p40 与宫颈鳞状细胞癌关系的研究极少。因此，本次研究进一步分析了p63 和p40 表达与患者临床病理特征的相关性，结果显示不同年龄、部位的宫颈鳞状细胞癌患者组织中p63 和p40 的阳性表达率无明显差异性（P均＞0.05），但不同临床分期、分化程度、肌层浸润深度及有无淋巴结转移、脉管浸润、宫旁浸润的患者组织中p63 和p40 的阳性表达率存在显著性差异（P＜0.05），表明p63 和p40 的表达与宫颈鳞状细胞癌患者的疾病恶性程度有关，其机制可能是由于p63 和p40 的表达上调促进了肿瘤细胞的上皮间质转化，从而使肿瘤细胞获得更强的迁移能力，进而增加了治疗细胞的恶性生物学行为。而且本次研究中p63 的研究结果与严浩等[10]和Zhang等[11]的研究结果相符。本次研究相关性分析显示，宫颈鳞状细胞癌组织中p63 与p40 的表达水平呈正相关（P＜0.05），表明p63 与p40 可能通过某种途径协同调控宫颈鳞状细胞癌的发生及发展过程，但具体相关途径有待今后进一步深入探讨。

综上所述，p63和p40在宫颈鳞状细胞癌组织中具有较高的阳性表达率，与患者的疾病恶性程度有关，且二者表达呈正相关，有助于宫颈鳞状细胞癌的临床鉴别诊断。存在的不足之处是纳入的样本量有限，今后会扩大样本量以进一步验证p63和p40在宫颈鳞状细胞癌临床鉴别诊断中的作用。