王 强， 董 年

（温州医科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科，浙江温州325000）

伴随着不断推进的工业化、城市化的进程，日益严重的空气污染是我国目前严重危害健康的公共卫生问题［1］。大气颗粒物（particulate matter，PM）是空气污染物中的重要成分，根据空气动力学直径又可划分为粗颗粒物（PM10）、细颗粒物（PM2.5）和超细颗粒物（PM0.1）。PM 可以随呼吸运动广泛沉积在肺脏，与肺部疾病的发生发展密切相关［2-3］。气道上皮是PM 进入肺脏后的第一道防线，目前认识到气道上皮不仅是肺脏结构细胞，而且扮演了启动细胞和继发受体的角色［4-5］。受限于难以直接获取PM 急性暴露的人体肺脏标本，目前PM 暴露气道炎症反应的分子机制尚未完全阐明。本研究拟采用PM 急性暴露的小鼠模型，观察肺脏的病理改变和炎症介质白细胞介素6（interlukin-6，IL-6）和白细胞介素8（interlukin-8，IL-8）的分泌。已知IL-6 和 IL-8 是常见的趋化因子，具有趋化中性粒细胞、级联扩大炎症反应、引发肺部疾病的作用［6-7］。不同于既往主要聚焦免疫细胞来源的IL-6 和IL-8，本研究拟在小鼠肺脏病理改变的基础上，采取肺脏固有结构细胞气道上皮细胞来研究PM诱导IL-6和IL-8的分子机制。

材 料 和 方 法

1 材料

6～8 周 SPF 级雄性 C57BL/6 小鼠（20～22 g）购自北京维通利华实验动物技术公司，许可证号为SXCK（京）2016-0011。人正常气道上皮细胞系BEAS-2B购自上海中科院细胞库。PM 购自NIST；RPMI-1640培养液和胎牛血清购自Gibco；兔抗人p-Akt和Akt抗体购自 CST；兔抗人 GAPDH 抗体购自 Santa Cruz；PI3K抑制剂LY294002 购自Sigma；BCA 蛋白浓度测定试剂盒、预染蛋白Marker和ECL发光液购自Thermo。

2 方法

2.1 动 物 模 型 选 取 20 只 6～8 周 SPF 级 雄 性C57BL/6 小鼠（20～22 g），均腹腔注射 10 mL/kg 的水合氯醛麻醉，随机分为 2 组（n=10）：（1）空白对照（vehicle）组：PBS 25 μL 气道滴注，连续气道滴注2 d；……