周 薇， 徐金升， 白亚玲， 张慧然， 何 雷， 张胜雷， 张东雪

（河北医科大学第四医院肾内科，河北石家庄050011）

血管钙化（vascular calcification，VC）与心血管疾病（cardiovascular diseases，CVD）和慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者的死亡率有关［1-2］，且在 CKD 患者全因死亡率中 CVD 死亡率占第1 位［3-4］。VC 是一个复杂的过程，涉及不同的分子途径，包括血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）转化为成骨细胞样细胞［5］。VSMCs 暴露于高磷（high phosphcrus，HP）和（或）高钙环境下会导致钙化增加，与成骨信号通路有关［6］，而成骨信号通路和VC 的主要特征是Runt 相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2，Runx2）的特异性上 调［7］。 miR-30s、miR-204 等 miRNAs 通 过 参 与VSMCs 向成骨样细胞的转分化，进而参与血管钙化［8］。miR-30b 在肿瘤细胞转移及凋亡中起着重要作用［9-10］。为进一步研究 HP 条件下 miR-30b 通过何种途径影响大鼠VSMCs 钙化，本研究以体外培养的大鼠VSMCs 为研究对象，探讨miR-30b 在HP 诱导的大鼠VSMCs钙化发生过程中的作用及其可能机制。

材 料 和 方 法

1 主要试剂

DMEM 培养液及胎牛血清均购自Gibco；β-甘油磷酸购自Sigma；茜素红染料购自Solarbio；钙含量测定试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司；碱性磷酸酶（abkaline phosphatase，ALP）活性检测试剂盒购自南京建成生物公司；RNA 提取试剂盒及RNA反转录试剂盒均购自Thermo Fisher；实时荧光定量PCR 试剂盒购自广州易锦生物技术有限公司；PCR引物、miR-30b 模拟物（miR-30b mimic，mimic-30b）及其阴性对照（mimic-NC）均购自广州市锐博生物科技有限公司；抗Runx2 抗体购自Abcam；抗GAPDH抗体购自Bioworld。

2 模型的制备与分组

2.1 体内实验 5/6 肾切除术加骨化三醇灌胃法构建钙化模型［11］。取4周龄、体重80～100 g的清洁级雄性健康SD 大鼠（由河北医科大学实验动物中心提供，合格证编号为1305090），随机分为假手术（sham）组和慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）所致VC（CRF+VC）组。……