樊琼玲， 张雪莲， 杨 菲， 刘 涛， 赵 军， 张石蕾， 由淑萍△

（新疆医科大学 1护理学院，2公共卫生学院，3新疆维吾尔自治区药研所，新疆乌鲁木齐830011）

心脏肥大（cardiac hypertrophy）是心脏长期处于压力超负荷下的一种常见的适应性反应，其持续进展会导致心力衰竭［1-3］。研究表明，在心脏肥大的动物及细胞模型中，心肌细胞凋亡水平升高，增殖减少［3-4］。内皮素转换酶 1（endothelin-converting enzyme 1，ECE1）是血管收缩肽内皮素1（endothlin 1，ET-1）生成的限速酶，是ECE 家族的主要成员，在肺、心脏、血管内皮组织等重要器官均有表达，主要存在于细胞质中，对于调节ET-1 的生成和多种信号通路具有重要意义［5-6］。ET-1 与血管舒张物质一氧化氮（nitric oxide，NO）相互协调，共同控制血管的舒缩［7-8］。本课题组前期在压力超负荷大鼠心脏肥大模型中观察到ECE1基因甲基化水平降低和磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/Akt）/内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthesis，eNOS）通路抑制［9-10］。但ECE1 在心脏肥大发生过程中与eNOS/NO信号通路的作用及具体机制仍不清楚。本研究旨在探讨过表达ECE1 对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）诱导的体外培养大鼠H9C2 心肌细胞肥大和凋亡水平的影响及其机制。

材 料 和 方 法

1 细胞和实验主要材料

H9C2 大鼠心肌细胞株购自武汉普诺赛生命科技有限公司。ECE-1 过表达质粒（pEX-3-ECE1）和空载质粒（pEX-3-NC）购自上海吉玛有限公司；Ang Ⅱ购自APExBIO；DMEM 培养液、磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline，PBS）、胎牛血清、胰蛋白酶和双抗溶液购自BI；Lipofectamine 2000 转染试剂购自Invitrogen；4×上样缓冲液和NO 含量检测试剂盒购自Solarbio；彩虹蛋白Marker 和BCA 蛋白检测试剂盒购自Thermo；FITC 偶联的Annexin-Ⅴ凋亡检测试剂盒购自BD Biosciences Pharmingen；快速质粒小量抽提试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；……