李 涵 潘 勤

内质网是真核细胞内一类膜性细胞器，有脂质合成、蛋白质加工及钙离子稳态调节等重要功能。当细胞受到损伤刺激时，可发生以内质网腔内错误折叠或未折叠蛋白积聚、钙离子平衡紊乱为特征的内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)[1]。适度的ERS有助于内质网稳态的恢复，持续的ERS则可能诱导细胞凋亡。

近年来伴随肥胖的全球流行和生活方式的逐渐西化，以肝细胞脂肪变性、气球样变、小叶内炎症等为主要病理表现的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)日益高发，已经成为公共卫生的重要负担[2]。有研究表明，ERS既能够诱导脂肪生成，又可参与胰岛素抵抗和自噬来驱动肝脏脂肪变性，从而在NAFLD的发生、发展过程中发挥着重要作用[3]。然而，ERS介导NAFLD的病理生理机制尚未完全阐明。

据近年来相关文献报道，应激可诱导一类tRNA衍生性小RNA(tRNA derived small RNA, tsRNA)的产生。tsRNA是由成熟tRNA或tRNA前体经酶切产生的非编码RNA[4]。研究显示，tsRNA在肥胖症、酒精性脂肪性肝病等代谢性疾病的发病机制中发挥重要作用[5～7]。因此，本研究采用棕榈酸钠诱导肝细胞脂肪变，从而建立ERS模型，以此为基础探讨tsRNA在肝脂肪变中的表达情况及其潜在功能。

材料与方法

1.材料：小鼠肝细胞株AML12由中国科学院细胞库提供； ITS液体培养基补充剂(100×,ITS liquid media supplement)、棕榈酸(palmitic acid, PA)及油红O粉末均购自美国Simga-Aldrich公司；胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)、DMEM/F12培养基购自美国Gibco公司；RT-qPCR试剂盒购自日本TaKaRa公司；葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78，GRP7) 兔单克隆抗体、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein C/EBP，CHOP)兔单克隆抗体购自美国CST公司；β-tubulin兔单克隆抗体及山羊抗兔二抗购自上海优宁维公司；……