杨德仁,王卓,马蓉

(江苏省肿瘤医院﹠江苏省肿瘤防治研究所﹠南京医科大学附属肿瘤医院 a.检验科，b.临床肿瘤实验中心，南京 210009)

甲状腺癌是常见的内分泌系统恶性肿瘤，近年来发病率不断升高[1-2]。其最常见的病理类型为甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer，PTC)，约占所有甲状腺癌的85%～90%[3-4]。临床上通常采用Sanger测序技术、免疫组化技术及实时荧光定量PCR技术等对PTC相关单个基因，尤其是BRAFp.V600E基因位点进行检测，为辅助鉴别诊断、预后和治疗提供依据[5-6]。近年来，与甲状腺恶性肿瘤的鉴别诊断、预后与治疗密切相关的新的分子标志物不断涌现[7]。高通量测序技术(next generation sequencing，NGS)作为新一代测序技术，可同时检测多个基因的多种变异类型，并可进行定量分析[8]。

本研究采用NGS技术及包含BRAF、HRAS、KRAS、NRAS、TERT、RET、PIK3CA、PTEN、TP53、CTNNB1、AKT1、GNAS、PAX8/PPARγ、NTRK1和TSHR等15个目标基因主要内含子和外显子的引物池对PTC患者进行基因检测并分析其结果。

1 材料与方法

1.1研究对象 收集2019年1月至2020年6月于南京医科大学附属肿瘤医院头颈科收治且术后经病理诊断为PTC患者的石蜡包埋样本188例。其中男性66例，女性122例，年龄20～75岁，中位年龄46 岁。纳入标准：(1)病理组织学明确诊断为PTC；(2)未合并其他肿瘤；(3)分期明确且病例资料完整。按照美国癌症联合委员会(American Joint Committee on Cancer,AJCC)第八版[9]分为Ⅰ期151例，Ⅱ期27例，Ⅲ期3例，Ⅳ期7例。本研究经南京医科大学医学伦理委员会批准(南医大伦审2020148号)，所有研究对象均知情同意。

1.2主要仪器及试剂 Nanodrop2000分光光度计(美国Thermo Scientific公司)， Huber Minichiller 300基因打断仪(德国Huber公司)，Biometra TONE PCR扩增仪(德国Biometra公司)，Novaseq 6000 基因测序仪(美国Illumina公司)。核酸提取试剂盒(QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，德国凯杰公司)，捕获磁珠(美国Beckman Coulter公司)。……