miR-198过表达抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的实验研究
2021-01-28李少海张文信渭南职业技术学院西医临床教研室陕西渭南7406渭南市中医医院骨科陕西渭南7406
赵 鑫,胥 朵,李少海,张文信 (.渭南职业技术学院西医临床教研室,陕西 渭南 7406;.渭南市中医医院骨科,陕西 渭南 7406)
视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)作为儿科比较常见的一种眼内恶性肿瘤,全球范围的发病率为1/20 000[1]。RB在非洲及一些发展中国家的发病率较高,并且患儿的5年生存率要低于发达国家[2]。RB发现越早其治愈的可能性越高,由于发病初期肿瘤体积小,并位于视网膜周边,不会有明显的视力影响,而一旦出现眼部症状后,治愈的可能性则明显降低[3]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类具有调控功能的非编码RNA,其核苷酸序列长度一般为19~25 bp,在细胞的增殖、分化及凋亡过程中发挥着重要的作用[4]。近年来大量实验研究证实,miRNA可作为原癌基因或抑癌基因参与到肿瘤的发生及进展中,因此miRNA具有成为治疗癌症靶点的潜在价值[5]。既往研究发现,miR-198能够通过抑制HGF/c-MET信号途径提高非小细胞肺癌的放疗敏感性,诱导细胞凋亡[6],并且能够通过调节ADAM28/JAK-STAT信号通路影响大肠癌的增殖和凋亡[7],还能够抑制TLR4蛋白表达及胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭[8],但miR-198在RB细胞中的调控机制尚未明确。因此本研究通过在RB细胞株系Y79细胞中转染miR-198模拟物,以探究miR-198对RB细胞生长、侵袭的影响,并进行裸鼠体内荷瘤试验,现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
miR-198 mimic及miR-NC(上海吉凯基因技术有限公司),脂质体、Lipofectamine®2000(美国Thermo Fisher Scientific),10%胎牛血清(美国Gibco公司),100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素(美国Invitrogen公司),TRIzol Kit、Revertaid First Strand cDNA Kit(Thermo Fisher科学公司),兔抗人Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin、GAPDH以及兔抗小鼠Ki67、SOX2、VEGF单克隆抗体(美国Abcam公司),细胞计数试剂盒(碧云天公司),铺有Matrigel胶的Transwell小室(美国BD公司),高速冷冻离心机(德国Beckman Coulter),正置荧光显微镜(日本Thermo),实时荧光定量PCR仪(罗氏诊断)。……
