冀国发 胡静怡 任徽

非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，约占肺癌的80%～85%左右[1-2]。NSCLC的主要治疗手段有外科手术、化疗和靶向治疗等，而以表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR)为靶点的药物治疗，如吉非替尼等，已成为晚期NSCLC治疗的重要手段，但几乎所有患者在一定时间内会产生耐药性[3-4]。因此，深入探索NSCLC治疗的耐药机制，具有临床研究意义。微小RNA(microRNA，miRNA)是保守的非编码小分子RNA，参与调控基因的表达，在肿瘤的发生、发展及产生耐药过程中发挥重要作用[5]。Zhou等[6]研究发现miR-1226可能与乳腺癌细胞中他莫昔芬的耐药性相关，但其是否对非小细胞肺癌细胞吉非替尼敏感性有影响尚不清楚。本研究旨在探讨miR-1226过表达对非小细胞肺癌细胞株吉非替尼敏感性的影响，并初步研究其对MUC1基因的靶向调控作用，为临床提供理论参考。

资料与方法

一、主要材料与仪器

NSCLC细胞株PC9GR(CM-2052)、PC-9(CM-1732)购自上海名劲生物科技有限公司；吉非替尼购自英国Astra Zeneea公司；1640培养基(含双抗)(31800)、胎牛血清(11011-8611)、胰蛋白酶消化液(0.25%)(T1350)、MTT噻唑蓝(M8180)、高效RIPA裂解液(R0010)、Trizol试剂盒(15596-018)、逆转录试剂盒(T2210-200T)购自北京索莱宝科技有限公司；细胞培养瓶(Scipu004231)购自无锡耐思生物科技有限公司；96孔细胞板(Scipu000969)购自美国Corning公司；miR-1226 mimic、miR-1226 NC由广州锐博生物生物技术有限公司设计；miR-1226、MUC1、U6、β-肌动蛋白引物均由上海生工生物工程有限公司合成；磷酸盐缓冲液(PBS)(C0221A)、ECL发光液(P0018FS)(上海碧云天生物技术有限公司)；MUC1兔单克隆抗体(EP1024Y)购自艾博抗(上海)贸易有限公司)；Matrigel胶(356230)购自上海前尘生物科技有限公司；PCR仪(5333型)购自德国Eppendorf公司；……