吴广升，王亚男，惠光艳，梅 涛，王忠山

miRNA是一种由21～25个核苷酸组成的较小的内源性非编码RNA，可以通过提高或抑制目的mRNAs的降解而调控增殖、分化、凋亡及癌变等一系列的细胞活动[1-2]。miRNA在干细胞成骨分化过程中发挥了非常重要的作用，已经被广泛应用于骨再生方面的研究，多种miRNA具有促进干细胞成骨分化的作用[3-4]。但由于游离miRNA存在极易降解性、细胞难以摄取，潜在的免疫源性等缺陷，必须采用合适的载体才能提高miRNA转染效率。壳聚糖(CS)是一种纯天然高分子多糖，自身带正电荷，可以作为RNA、DNA、生长因子及抗肿瘤药物载体[5]。CS基纳米粒作为一种非病毒载体，避免了外源基因序列的插入，但将其应用于miRNA转染体系仍存在转染效率不高的问题[6]。基因反向转染技术是先将DNA(或RNA)通过基质锚定在一定界面上，再将细胞接种于该基质表面，细胞贴壁的同时摄取锚定在介质表面DNA(或RNA)而实现基因转染。与常规转染方法相比，该转染体系可更有效地接触细胞表面从而达到更高的转染效率和更低的细胞毒性等效果[7-8]。miR-21是一种具有促进成骨分化作用的miRNA，可上调成骨相关基因表达，在体内可促进骨组织再生[9]。本实验制备壳聚糖/三聚磷酸钠/透明质酸/miR-21纳米粒(CTH/miR-21 NPs)并对牙周膜干细胞(PDLSCs)进行反向转染，观察其转染效率及促进成骨基因表达作用，为CTH/miR-21 NPs进一步应用于促进牙周组织再生提供经验。

1 材料与方法

1.1主要材料与设备 CS(医用级，脱乙酰度≥90%，分子量约100 kDa，金壳药业，浙江)，透明质酸(HA,分子量约10 kDa，福瑞达医药，山东)，α-MEM培养基、胎牛血清、PBS、双抗(Hyclone,美国)；……