杨思琪，赵海霞，尤 旭，马琼艳，杨 圆，张 艳，叶 勇，吴 杰，袁 丁，张长城

(三峡大学医学院，湖北 宜昌 443002)

近年来，不育已被WHO确认为一个公共卫生问题，在普通人群中的发病率逐年增高。一项调查研究显示，全世界约有15%的成年夫妇患有原发性不育症，其中由男性因素导致的不育约占50%，而其具体成因机制尚不十分清楚[1]。研究发现，精原细胞损伤所致男性生精功能障碍是导致男性不育的主要原因[2]。另有研究显示，DNA损伤是导致精原细胞功能受损的主要原因之一[3-4]。近年来发现射线、活性氧(ROS)、化疗药物等都会导致睾丸生精细胞DNA损伤，从而导致睾丸功能障碍，但其研究主要聚焦在动物水平上，在细胞水平上研究甚少，且目前仍缺乏较好的细胞模型。因此，本研究以小鼠睾丸精原细胞株GC-1细胞为研究对象，采用UVB辐照、D-半乳糖(D-galactose，D-Gal)、博来霉素(bleomycin，BLM)刺激建立3种GC-1细胞DNA损伤模型并进行比较和评价，以期为防治因DNA损伤所致男性不育提供相应的实验模型。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1细胞株 小鼠精原细胞株GC-1细胞购自上海通派生物细胞库。

1.1.2药物及试剂 D-Gal购于美国Sigma公司，批号：WXBC9497V；BLM购于瀚晖制药有限公司，批号：19012311；ECL显影液购自碧云天生物技术研究所；苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfluoride，PMSF)、RIPA裂解液、磷酸蛋白酶抑制剂购自武汉谷歌生物有限公司；BCA蛋白定量试剂盒购自北京普利莱基因技术有限公司；β-actin(批号：#4970L)、p-p53(批号：#12571)购自美国Cell Signaling Technology公司；γ-H2AX(批号：sc-101696)购自Santa Cruz公司；p21(批号：ab109199)购自美国Abcam公司；辣根过氧化物酶 (Horseradish Peroxidase，HRP)标记的山羊抗鼠 IgG、HRP标记的山羊抗兔二抗购自武汉科瑞科技有限公司。……