李 成，楼迪栋，齐晓岚，范海琼，朱 卫，潘际刚

(1.贵州医科大学基础医学院生理学教研室，2.贵州中医药大学基础医学院，3.贵州医科大学分子生物学重点实验室，贵州 贵阳 550025)

砷是一种广泛分布于环境中的环境毒物。砷常通过水、食物、空气等途径进入人体后引起人的器官或组织损伤[1]。研究表明，砷具有神经毒性作用，其可以通过血脑屏障直接造成人大脑皮质组织不可逆性损伤，从而引起人认知功能障碍，并造成学习、记忆能力的减弱[2-3]。因此，开展对于砷的神经毒性损伤及其作用机制的研究对于防治砷中毒具有重要现实意义。本课题组前期研究表明，亚砷酸钠对SH-SY5Y神经细胞具有毒性作用，而外源性过表达MPST蛋白可以拮抗砷所致的神经毒性损伤[4]。而本研究以慢病毒转染稳定表达外源MPST的SH-SY5Y细胞为观察对象，检测砷暴露前后GRP78和CHOP蛋白表达水平，进一步探讨内质网应激通路是否参与砷神经损伤以及MPST过表达对砷诱导的内质网应激水平的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞系 人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞，购自德国DSMZ公司稳定感染慢病毒载体的人的SH-SY5Y细胞(SH-PEB细胞)稳定感染MPST重组慢病毒载体的SH-SY5Y细胞(SH-MPST细胞)

1.1.2试剂 胎牛血清(Gibco)，购自以色列BioInd公司(批号:10099141C)；青霉素-链霉素，购自美国Gibco公司(批号:15140163)；胰蛋白酶，购自美国Gibco公司(批号:25200056)；磷酸盐缓冲液(PBS)，购自北京索莱宝公司(批号:P1032)；DMEM培养基，购自美国Hyclone公司(批号:SH30081)；NaAsO2，购自美国Sigma公司(批号:S7400)；葡萄糖调节蛋白78蛋白(glucose regulated p rotein，GRP78)抗体(批号:sc-166490)、转录因子C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein，CHOP)抗体(批号:sc-365318)、抗小鼠IgG-HRP二抗(批号:P1032)，购自美国Santa Cruz公司，牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)，购自购自美国Sigma公司(批号:sc-2005)。……