王丽君 李宏松 张文怡 廖丁莹 杨熹婷 王建明

青光眼是常见的不可逆致盲性眼病，滤过手术是抗青光眼的主流治疗方法，但术2年的失败率高达15%～30%[1]，研究显示Tenon’s囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts，HTFs)的增殖、迁移以及纤维化在滤过泡瘢痕化过程中发挥着重要作用[2，3]。研究HTFs的功能和生长特性有助于了解滤过泡瘢痕形成的机制，也可以为抗滤过泡瘢痕化药物的研究提供平台。成纤维细胞的分离及原代培养方法多种多样，应用较多的有组织块法和酶消化法[4，5]。组织块法是将组织剪碎后直接铺于培养皿底部，加培养基，经过数日培养后细胞从组织块周围贴壁爬出生长。酶消化法是将组织块经多种蛋白酶消化后种植于培养皿中，培养分离成出纤维细胞。由于酶消化法步骤繁琐、所需试剂种类多、操作技术要求高、易污染等原因，现多采用组织块法培养原代HTFs。但传统的组织块培养方法存在组织块贴壁率低、细胞不易爬出、培养效率低的问题，为了解决此类问题，本研究对人Tenon’s囊成纤维细胞的组织块培养方法进行了优化，意在探讨一种简单、经济、有效的原代人Tenon’s囊成纤维细胞培养方法并对体外培养的HTFs的生物学特性进行研究。

资料与方法

一、材料

主要实验材料有胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(Gibco公司)、DMEM培养基(HyClone公司)、0.25%胰蛋白酶-EDTA(Gibco公司)、青链霉素混合液(索莱宝公司)、PBS(Heart公司)、小鼠抗人波形蛋白(Vimentin)单克隆抗体(Santa Cruze公司)、小鼠抗人角蛋白(Cytokeratin)单克隆抗体(Abcam公司)、山羊抗小鼠DyLight649二抗(Abbkine公司)、山羊抗兔DyLight649二抗(Abbkine公司)、DAPI(碧云天……